浙江部分地區(qū)雞源隱孢子蟲病流行病學(xué)調(diào)查及其分子種系發(fā)育關(guān)系分析.pdf

1、隱孢子蟲（Cryptosporidium）是一種重要的人畜共患食源性寄生蟲，屬細(xì)胞內(nèi)專性寄生的頂復(fù)門原蟲，主要侵害人和大多數(shù)脊椎動(dòng)物的胃腸道和呼吸道上皮細(xì)胞，引起不同程度的疾病癥狀。隱孢子蟲?。–ryptosporidiosis）是由一種或幾種隱孢子感染而引起的疾病，目前為止，已有100多個(gè)國家報(bào)道過此病。隱孢子蟲是機(jī)會(huì)致病病原，對于老人、小孩、免疫缺陷患者（尤其是AIDS），此病將導(dǎo)致嚴(yán)重的腹瀉或營養(yǎng)不良，有時(shí)甚至危及生命。
　

2、　 隱孢子蟲能感染30多種禽類，引起禽類的消化道和呼吸道疾病，導(dǎo)致生長速度減慢、產(chǎn)蛋性能下降等結(jié)果;嚴(yán)重感染時(shí)（尤其對于產(chǎn)蛋雞），呈現(xiàn)高死亡率，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。禽類隱孢子蟲有效種僅有3個(gè)，分別是貝氏隱孢子蟲（C.baileyi）、火雞隱孢子蟲（C.meleagridis）、雞隱孢子蟲（C.galli）;另外據(jù)研究報(bào)道的有11種基因型，分別是禽基因Ⅰ-Ⅴ型(Avian genotypeⅠ-Ⅴ)、鵝基因Ⅰ-Ⅳ型(Goose genot

3、ypeⅠ-Ⅳ)、鴨基因型(Duck genotype)、丘鷸基因型(Eurasianwoodcock genotype)，它們在基因水平和形態(tài)上均有較大差異。禽類流動(dòng)性大、不易控制，尤其有些鳥類隨季節(jié)變化南北遷移，若作為隱孢子蟲傳染源將存在巨大的公共衛(wèi)生學(xué)安全隱患。
　　 為系統(tǒng)掌握浙江地區(qū)雞源隱孢子蟲流行情況，2010年11月至2012年1月，對浙江省7個(gè)不同地區(qū)采集樣品385份，分別用改良抗酸性染色和飽和蔗糖漂浮法檢測樣品，

4、進(jìn)行禽類隱孢子蟲感染情況的調(diào)查。檢測結(jié)果顯示:平均感染率為9.87％(38/385)，杭州、湖州、嘉興、金華、寧波、紹興、衢州各地區(qū)感染率分別為16.7％、16.9％、7.7％、12.1％、5.26％、2.33％、4.00％。對陽性樣品中卵囊形態(tài)大小進(jìn)行測量，發(fā)現(xiàn)絕大部分陽性樣品中卵囊大小為5.42μm-6.72μm×4.53μm-5.62μm，平均5.96μm×4.73μm，平均卵囊指數(shù)為1.26，根據(jù)卵囊形態(tài)及DIC形態(tài)觀察初步可確

5、定絕大部分為C.baileyi。
　　 為鑒定浙江省雞源隱孢子蟲的種類/基因型，應(yīng)用Xiao等建立的18S rRNA基因巢氏PCR-RFLP方法可快速得到初步結(jié)果。基于18S rRNA基因，對25個(gè)雞源隱孢子蟲分離株進(jìn)行巢氏PCR擴(kuò)增，目的片段約830bp;用限制性內(nèi)切酶SspI和VspI對PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳;結(jié)果顯示:25個(gè)分離株中有20個(gè)為C.baileyi，2個(gè)為C.meleagridis，另外3個(gè)樣

6、品酶切結(jié)果異常，不能確定具體的種類/基因型。
　　 通過基于18S rRNA基因種系發(fā)育關(guān)系鑒定浙江省雞源隱孢子蟲分離株的種類/基因型，利用巢氏PCR對12個(gè)需進(jìn)一步分析的隱孢子蟲分離株的18S rRNA進(jìn)行擴(kuò)增，并對擴(kuò)增序列進(jìn)行測序。獲得目的序列后，從GenBank上下載相關(guān)序列，并用DNAStar、MEGA4.0進(jìn)行序列同源性及種系發(fā)育關(guān)系分析，確定分離株為C.baileyi、C.meleagridis、Avian geno