枳實(shí)中黃酮類化合物的提取、分離、鑒定與生物活性研究.pdf

1、本文以枳實(shí)中黃酮類化合物提取、分離純化為目的,運(yùn)用乙醇回流法為提取手段,實(shí)現(xiàn)黃酮類化合物的最大化利用。經(jīng)過提取、分離、純化得到七種黃酮化合物單體,借助RP-HPLC、ESI-MS、1D-,2D-NMR等現(xiàn)代儀器對黃酮類化合物進(jìn)行了分析和結(jié)構(gòu)鑒定。 1.枳實(shí)粗提物中黃酮苷類化合物檢測方法的確定。 運(yùn)用RP-HPLC法,確立在島津ODS柱(RP-18,5μm,250mm×4.6)上,以①流動(dòng)相：水:乙腈(v/v)=78％等梯

2、度25min后,10min內(nèi)水的體積轉(zhuǎn)為10％并保留此梯度20min;②流速：0.8ml/min;③檢測波長：280nm完成分析。該方法大大提高了黃酮苷類化合物檢測的專屬性和有效性,分析結(jié)果較為準(zhǔn)確可靠。在該條件下,以LC/MS為檢測方法,初步鑒定出粗提物中含有四種黃酮苷類化合物,并以此四種黃酮苷類化合物的提取率作為優(yōu)化枳實(shí)中黃酮類化合物提取工藝的標(biāo)準(zhǔn)。 2.枳實(shí)中黃酮苷類化合物提取工藝的確定。 研究了乙醇提取液濃度、提

3、取時(shí)間、料液比對黃酮苷類化合物提取率的影響并確定提取次數(shù),根據(jù)四種黃酮苷峰面積之和所占的百分比判斷提取率的大小,確定適合大量提取的工藝。綜合考慮提取和后期處理成本,以采用60％乙醇水溶液,回流提取1.5h,按照1:10的料液比,提取2-3次為宜。 3.枳實(shí)中黃酮類化合物分離、純化與鑒定。 分離純化并鑒定了四種黃酮苷類化合物、三種多甲氧基黃酮化合物：蕓香柚皮苷(narinrutin)、柚皮苷(naringin)、橙皮苷(h

4、esperidin)、新橙皮苷(neohesperidin);桔皮晶(tangeretin)、蜜桔黃素(nobiletin)、4',5,7,8-四甲氧基黃酮(4',5,7,8-Tetramethoxyflavone)。其中桔皮晶,蜜桔黃素,4',5,7,8-四甲氧基黃酮在此前與枳實(shí)相關(guān)的其他文獻(xiàn)中未見報(bào)道,很可能是首次從該中藥中分離得到的。 4.枳實(shí)中多甲氧基黃酮的生物活性研究。 對桔皮晶、蜜桔黃素,4',5,7,8-四