中藥耐藥大腸桿菌生物膜形成能力的研究.pdf

1、細(xì)菌感染可發(fā)生于機(jī)體的各個部位，是臨床各科常見的疾病，隨著人們不規(guī)范應(yīng)用抗生素及濫用抗生素，細(xì)菌耐藥的現(xiàn)象越來越多。消除感染及控制感染的蔓延至關(guān)重要。多數(shù)人認(rèn)為，中草藥安全，高效，不耐藥，近幾年，一些臨床醫(yī)生發(fā)現(xiàn)，中藥在“抗感染”治療的中后期，療效降低。廣大研究者進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)多種細(xì)菌對單味中草藥和中草藥配方存在耐藥現(xiàn)象。目前，諸多學(xué)者主要致力于細(xì)菌對抗生素耐藥的研究上，研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌對抗生素耐藥主要是形成生物膜，形成生物膜后，細(xì)菌通

2、過多途徑耐藥，阻止抗生素的進(jìn)入，細(xì)菌本身發(fā)生基因突變及基因重組，外排系統(tǒng)等使抗生素失去作用。有研究已經(jīng)證實，細(xì)菌對傳統(tǒng)中草藥耐藥，但耐藥的機(jī)制仍不明確，故進(jìn)行實驗研究。
　　目的：探究中藥耐藥大腸桿菌耐藥質(zhì)粒的傳遞與鑒定及生物膜形成能力。
　　方法：從臨床患者的標(biāo)準(zhǔn)尿液中提取病原菌，并進(jìn)行鑒定，測定鑒定為實驗所需菌株對溫陽通淋湯耐藥菌的最小抑菌濃度（MIC），使實驗菌株在1/2MIC實驗藥物的M-H肉湯培養(yǎng)基中擴(kuò)增，每隔3天

3、轉(zhuǎn)種一次，9天后挑單個菌落于4倍MIC的含藥平板上，測定其耐藥性。1/2MIC誘導(dǎo)細(xì)菌耐藥，4MIC篩選，提取耐藥菌的質(zhì)粒；將耐藥質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至Trans5ɑ，涂布于含藥4MIC平板上，觀察菌落的生長情況；將Trans5ɑ，Trans10分別涂布于含藥6.2g/L平板上，觀察菌落生長情況；將耐藥質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至Trans10，涂布于含藥4MIC平板上，觀察菌落的生長情況；挑取菌株5028，4996兩個單克隆，1/2MIC誘導(dǎo)，4MIC篩選，提取其

4、質(zhì)粒，同時提取轉(zhuǎn)化菌質(zhì)粒，觀察質(zhì)粒變化情況；以耐藥菌株和敏感菌株分組，按文獻(xiàn)記載方法，將實驗菌株至于LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使其形成生物膜，用NaCl溶液沖洗，1％結(jié)晶紫染色，蒸餾水沖洗、風(fēng)干，乙酸溶解后，測量在波長570nm時吸光度的平均值；以對中藥耐藥、敏感分組，分析耐藥菌株和敏感菌株生物膜形成能力的強(qiáng)弱。
　　結(jié)果：耐藥菌株對溫陽通淋湯的最小抑菌濃度（MIC），為50g/L；對3株誘導(dǎo)篩選后大腸桿菌進(jìn)行質(zhì)粒提取，轉(zhuǎn)化，結(jié)果如圖2所

5、示，耐藥質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至Trans5ɑ后，培養(yǎng)于4MIC平板上，細(xì)菌能夠在含藥平板上正常生長；Trans5ɑ、Trans10分別涂布于含藥6.2g/L平板上，均能在平板上正常生長；耐藥質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至Trans10后，培養(yǎng)于4MIC平板上，轉(zhuǎn)化后細(xì)菌能在含藥平板上正常生長；提取轉(zhuǎn)化后細(xì)菌質(zhì)粒，與單克隆5028,4996質(zhì)粒相等；通過生物膜形成能力柱形圖發(fā)現(xiàn)，耐藥組形成生物膜能力明顯強(qiáng)于敏感組，生物膜形態(tài)顯示耐藥組生物膜面積明顯大于敏感組。