滋腎通絡(luò)方對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 糖尿病腎病(diabeticnephropathy，DN)近年來(lái)已經(jīng)成為影響國(guó)民健康的重大問(wèn)題。腎小球系膜細(xì)胞(glomerularmesangialcells，GMCs)是最早成為DN的發(fā)病機(jī)制和藥物作用靶點(diǎn)的研究對(duì)象的。GMCs的活躍性使得其在受到持續(xù)的高糖或代謝紊亂等的刺激是會(huì)發(fā)生自身的增殖，并引起分泌過(guò)量的細(xì)胞外基質(zhì)(ExtracellularMatrix，ECM)。ECM過(guò)度積聚系膜區(qū)則會(huì)促使基底膜增厚，

2、日久則會(huì)導(dǎo)致的腎小球硬化以及間質(zhì)纖維化，此基本病理改變會(huì)貫穿于DN病程的始終。與此同時(shí)，GMCs還可以分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMPs)，正常狀態(tài)下，該酶可以維持ECM生成與降解的動(dòng)態(tài)平衡，DN發(fā)生時(shí)，該酶類降解能力的失衡引發(fā)ECM過(guò)度聚積。ECM的主要成分為Ⅳ型膠原，基質(zhì)金屬降解酶-2(matrixmetalloproteinase-2，MMP-2)、基質(zhì)金屬降解酶-9(matrixmeta

3、lloproteinase-9，MMP-9)是降解該膠原的主要的基質(zhì)金屬蛋白酶類。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1)作為致腎小球纖維化的重要的細(xì)胞因子，可以通過(guò)直接導(dǎo)致腎臟ECM分泌過(guò)多，也可通過(guò)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的活性間接導(dǎo)致ECM的過(guò)度積聚，加速DN的進(jìn)程。
　　 中醫(yī)藥在防治DN方面經(jīng)常通過(guò)多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)共同作用改善患者的臨床癥狀，延緩糖尿病腎病的進(jìn)程，具有其獨(dú)特的優(yōu)

4、勢(shì)。因此對(duì)于中醫(yī)藥防治DN的機(jī)制研究就顯得尤其重要。本論文在馬建偉教授前期研究的滋腎通絡(luò)方可以有效防治DN的基礎(chǔ)上，應(yīng)用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，從細(xì)胞外基質(zhì)降解的角度，以苯那普利作為陽(yáng)性藥物，以高糖環(huán)境下LPS刺激的大鼠腎小球系膜細(xì)胞作為模型，觀察滋腎通絡(luò)方含藥血清對(duì)于大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖以及TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA表達(dá)的影響，探討滋腎通絡(luò)方治療DN的機(jī)制，為進(jìn)一步研究其防治DN的作用機(jī)理提供理論依據(jù)。
　　 方法:

5、
　　 1、應(yīng)用血清藥理學(xué)方法，制備滋腎通絡(luò)方不同劑量含藥血清;
　　 2、采用高糖+LPS作為刺激因子，培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞，促使其增殖;
　　 3、將大鼠腎小球系膜細(xì)胞分為8組:
　　 (1)正常組;(2)高糖組;(3)高糖加LPS組;(4)苯那普利組;(5)滋腎通絡(luò)方小劑量組;(6)滋腎通絡(luò)方中劑量組;(7)滋腎通絡(luò)方大劑量組;(8)芪地合劑組;
　　 4、MTT法:檢測(cè)滋腎通絡(luò)方含藥血清

6、對(duì)于大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖情況的影響。
　　 5、RT-PCR:檢測(cè)各組大鼠腎小球系膜細(xì)胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、與正常組相比，高糖+LPS能明顯刺激體外培養(yǎng)的GMCs增殖，而與模型組相比，滋腎通絡(luò)方含藥血清能明顯抑制GMCs增殖(P＜0.05)。
　　 2、大鼠腎小球系膜細(xì)胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA水平的表達(dá):與模型組相比較，滋腎

7、通絡(luò)方大、中、小劑量組對(duì)大鼠腎小球系膜細(xì)胞TGF-β1mRNA表達(dá)顯著降低(P＜0.05)，MMP-2、MMP-9mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、滋腎通絡(luò)方含藥血清能明顯抑制高糖+LPS條件下GMCs增殖;
　　 2、滋腎通絡(luò)方含藥血清能夠抑制大鼠腎小球系膜細(xì)胞TGF-β1mRNA的表達(dá)，增加MMP-2、MMP-9mRNA的表達(dá)，從而通過(guò)增加腎小球系膜細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)的降解以延緩DN