β-防御素1基因在小鼠乳腺組織中表達(dá)的研究.pdf

1、β-防御素具有廣譜的抗菌活性且是宿主闈有防御的重要參與者,在奶牛乳腺炎防治方面具有廣闊的應(yīng)用前景。為了研究β-防御素1(β-defensin1,Defbl)基因在小鼠乳腺中的表達(dá)情況,本文以小鼠第四對乳腺組織為研究對象,用半定量RT-PCR法探討了小鼠乳腺發(fā)育周期(妊娠、泌乳、退化)中Defbl基因的表達(dá)規(guī)律及大腸桿菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)小鼠乳腺炎時乳腺中Defbl基因表達(dá)的差異。
　　 一

2、、Defbl基因在小鼠乳腺組織中的表達(dá)。利用Genbank上已公布的小鼠Defbl基因序列,設(shè)計一對引物,小鼠乳腺組織提取總RNA進(jìn)行RT-PCR,將PCR產(chǎn)物與pMD-19T載體連接后轉(zhuǎn)化劍DH5α感受態(tài)細(xì)胞中,篩選陽性克隆、測序,并進(jìn)行序列比對。結(jié)果表明:Defbl基因在小鼠乳腺組織中有表達(dá)。
　　 二、小鼠乳腺發(fā)育周期中Defbl基因的表達(dá)規(guī)律。分別取小鼠妊娠1d、6d、12d、18d;泌乳1d、6d、12d、18d；21

3、天自然斷乳0d、1d、2d、3d、4d、5d的乳腺組織,采用半定量RT-PCR法進(jìn)行研究。結(jié)果顯示:隨著妊娠的進(jìn)行Defbl轉(zhuǎn)錄水平逐漸升高,且各時期差異顯著,妊娠18d轉(zhuǎn)錄水平最高；在泌乳過程中,Defbl轉(zhuǎn)錄水平呈下降趨勢,與泌乳1d相比,泌乳6d時Defb1mRNA水平下調(diào),但差異不顯著,妊娠12d,18d Defbl的轉(zhuǎn)錄水平顯著下降；自然斷乳后Defbl基因表達(dá)量呈現(xiàn)先下降后上升再下降的變化趨勢,與0d相比,斷乳后第1d和第2

4、d mRNA水平即顯著降低,3d時Defbl轉(zhuǎn)錄水平出現(xiàn)顯著升高,達(dá)到峰值。此后4d,5d Defbl mRNA水平又下降。
　　 三、Defbl基因在LPS誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎中的表達(dá)差異。按1.4μg/只劑量在泌乳10d母鼠第四對乳腺基部注射LPS,誘導(dǎo)小鼠乳腺炎。分別取注射LPS前(0h)和注射后6h、9h、12h、24h乳腺組織,采用半定量RT-PCR法研究Defbl表達(dá)量差異。結(jié)果顯示:與0h相比,誘導(dǎo)后各時期Defbl基