產(chǎn)前先天性心臟病胎兒的全基因組基因拷貝數(shù)變異分析.pdf

1、目的：先天性心臟病(CHDs)是指出生前由于各種原因?qū)е碌男呐K、血管結(jié)構(gòu)和功能上的異常疾病，是圍產(chǎn)期胎兒死亡的主要原因，約10％的孕婦因此病而流產(chǎn)。2012年我國衛(wèi)生部發(fā)布了《中國出生缺陷防治報告》，其中提到CHDs患者占我國出生缺陷人口的27.6％，為發(fā)病率最高的出生缺陷性疾病。CHDs的發(fā)生與環(huán)境因素和遺傳因素都有關(guān)。遺傳因素方面，至今僅明確55個基因為CHDs的致病基因，仍有相當(dāng)一部分基因與CHDs的相關(guān)性有待進(jìn)一步的探究。近五年

2、，人們對于心臟發(fā)育分子通路的研究越發(fā)深入，多個研究證實，基因拷貝數(shù)變異(CNV)通過影響基因的劑量水平或功能改變，與CHDs密切相關(guān)。全基因組微陣列技術(shù)(CMA)的應(yīng)用與推廣，特別是單核苷酸多態(tài)性微陣列技術(shù)(SNP array)，正是針對檢測CNV發(fā)展起來的一項分子檢測技術(shù)。應(yīng)用該技術(shù)研究CHDs可以發(fā)現(xiàn)大量與CHDs相關(guān)的CNV，進(jìn)一步挖掘基因劑量與CHDs的關(guān)系，從而拓展我們對CHDs發(fā)生的分子機制認(rèn)識，并發(fā)現(xiàn)可能與CHDs發(fā)生相關(guān)

3、的致病基因。本研究同時比較了各種分子生物學(xué)技術(shù)，特別是SNP array與傳統(tǒng)核型分析技術(shù)，在遺傳病因?qū)W檢測方面的優(yōu)劣勢，通過探究致病性或潛在致病性CNV與CHDs的相關(guān)性，評估SNP array等分子生物學(xué)技術(shù)診斷CHDs的臨床應(yīng)用價值。
　　方法：對44例經(jīng)超聲心動圖確診為CHDs，但無法明確病因的胎兒進(jìn)行遺傳病因?qū)W分析。在超聲引導(dǎo)下，穿刺采集CHDs胎兒的羊水和臍帶血樣本，對所得樣本行核型分析和SNP array檢測。根據(jù)2

4、011年美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)委員會制定的CNV致病性判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行CNV分類，將檢測所得到數(shù)據(jù)導(dǎo)入多個CNV數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對分析，同時結(jié)合實時熒光定量PCR和多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)(MPLA)對罕見CNV進(jìn)行驗證及父母溯源分析。通過以上傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)與分子生物學(xué)相結(jié)合的檢測策略著重對CHDs胎兒的染色體畸變與全基因組CNV進(jìn)行檢測和分析。
　　結(jié)果：總共收集經(jīng)超聲心動圖確診為CHDs胎兒樣本44例。核型分析發(fā)現(xiàn)異常核型5例，異常檢出率約為

5、11.4％。排除核型分析異常的樣本，應(yīng)用SNP array檢測其余39例CHDs胎兒，在38例胎兒中檢出CNV，CNV覆蓋率約為97.4％，其中7(17.9％)例胎兒攜帶有異常CNV，包括致病性CNV攜帶者4例和可能致病性CNV攜帶者3例;2(5.1％)例胎兒攜帶有不確定的CNV，其余胎兒均攜帶良性或可能良性CNV。我們檢出的7例攜帶異常CNV的胎兒中，3例胎兒攜帶的罕見CNV未在其他CHDs與CNV研究中被報道過，分別為16q12.2

6、微缺失，Xp11.4微重復(fù)和Xq28微重復(fù)，其中分別包含了三個與心血管發(fā)育相關(guān)的候選基因:RBL2(16q12.2)、BCOR(Xp11.4)、FLNA(Xq28)。
　　結(jié)論：應(yīng)用SNP array技術(shù)檢測CHDs胎兒攜帶的異常CNV并深入探討CNV與CHDs之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)了三個可能與心臟發(fā)育或結(jié)構(gòu)功能相關(guān)的基因。本研究結(jié)果對CHDs相關(guān)的關(guān)鍵基因的定位以及CNV致病機理的研究都有非常大的推動作用。同時，本研究對4例CHDs胎