基于納米材料構(gòu)建新型磷酸化肽傳感器的研究.pdf

1、磷酸化作用是一種普遍存在的蛋白質(zhì)及多肽的翻譯后修飾作用，控制著細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、信息傳遞等多種生命活動(dòng)。不正常的磷酸化作用會(huì)導(dǎo)致癌癥、麻風(fēng)病、阿爾茨海默病等疾病。因此磷酸化肽的確認(rèn)、定量檢測(cè)，以及相關(guān)激酶活性的檢測(cè)等，在生命過(guò)程的理解及疾病治療等方面具有重要意義。電化學(xué)檢測(cè)磷酸化作用常涉及兩個(gè)方面：一是通過(guò)分析激酶活性來(lái)確定磷酸化程度或篩選相關(guān)的激酶抑制劑；二是定量檢測(cè)磷酸化產(chǎn)物來(lái)分析磷酸化作用。本論文中，我們側(cè)重于磷酸化肽的定量檢測(cè)，利

2、用金屬氧化物與磷酸根基團(tuán)之間的配位作用，設(shè)計(jì)了兩種電化學(xué)傳感器體系來(lái)快速準(zhǔn)確的定量磷酸化肽，主要研究包括：
　　1.石墨烯-TiO2(RGO-TiO2)納米復(fù)合材料修飾電極檢測(cè)磷酸化肽
　　采用改進(jìn)的Hummers法制備了氧化石墨烯(GO)，并通過(guò)水熱法一步制備了RGO-TiO2納米復(fù)合材料，將其作為磷酸化肽(P-peptides)的捕獲界面，以鐵氰化鉀為電化學(xué)探針，建立了一種簡(jiǎn)單靈敏無(wú)標(biāo)記的電化學(xué)檢測(cè) P-peptides

3、的方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，吸附磷酸化肽前后，峰電流發(fā)生明顯變化，而非磷酸化肽不能引起明顯變化，說(shuō)明該體系在一定程度上可以用于磷酸化肽與非磷酸化肽的區(qū)分。且隨著P-peptides濃度增加，峰電流的逐漸減小。峰電流與P-peptides濃度的對(duì)數(shù)，在1~500μM范圍內(nèi)存在線性關(guān)系，滿足回歸方程I=89.676-20.150x(x是對(duì) P-peptides濃度取對(duì)數(shù))，線性系數(shù)為0.947，檢出限為0.953μM(S/N=3)。
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4、.利用競(jìng)爭(zhēng)吸附的方法在多孔 ZrO2薄膜電極上電化學(xué)檢測(cè)磷酸化肽
　　通過(guò)氫氣泡模板法制備多孔 ZrO2薄膜作為 P-peptides的捕獲界面，利用ZrO2與磷酸基團(tuán)之間的配位作用，P-peptides取代之前修飾電極表面吸附的電活性標(biāo)記的非磷酸化肽(Fc-peptides)，建立了一種競(jìng)爭(zhēng)吸附的電化學(xué)新方法來(lái)定量檢測(cè) P-peptides。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，P-peptides濃度在0.1~500μM內(nèi)，降低的Fc峰電流與 P-p