花椒籽蛋白降血壓肽的制備及性質(zhì)研究.pdf

1、花椒籽是調(diào)味料花椒果皮生產(chǎn)的主要副產(chǎn)物，其中富含蛋白質(zhì)，且氨基酸組成齊全，是一種優(yōu)質(zhì)、無(wú)毒的新型植物蛋白質(zhì)資源。目前對(duì)花椒籽的研究主要集中在優(yōu)化花椒籽油的提取工藝，關(guān)于花椒籽蛋白質(zhì)開(kāi)發(fā)利用的研究報(bào)道很少。本研究采用響應(yīng)面法優(yōu)化酶解花椒籽蛋白制備降血壓肽的工藝，同時(shí)采用超濾膜法和Sephadex G-25凝膠層析對(duì)其進(jìn)行初步純化，并對(duì)該降血壓肽主要的性質(zhì)進(jìn)行了研究，為花椒籽蛋白降血壓肽的進(jìn)一步加工利用奠定了理論基礎(chǔ)。本研究主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)

2、果如下:
　　1.采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶5種不同蛋白酶分別水解花椒籽蛋白，以酶解物對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制率為指標(biāo)，篩選出制備花椒籽蛋白降血壓肽的最佳蛋白酶為木瓜蛋白酶。在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，根據(jù)Box-Benhnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，考察酶解時(shí)間、加酶量、酶解溫度和pH值等制備條件對(duì)獲得的酶解產(chǎn)物ACE抑制率的影響。結(jié)果表明:回歸模型能較好地反映各因素水平與響應(yīng)值之間的關(guān)系，并獲

3、得酶解花椒籽蛋白制備降血壓肽的最佳工藝參數(shù)為:底物質(zhì)量濃度3 g/100mL，酶解時(shí)間4.9 h，加酶量10200 U/g，酶解溫度為37℃，pH值為6.9，在此條件下，所得酶解產(chǎn)物的ACE抑制率為68.00％。
　　2.采用截留分子量為5 kDa的超濾膜超濾酶解液，其中超濾液組分ACE抑制率得到顯著提高(p＜0.05)，達(dá)到78.75％。將該組分真空冷凍干燥后用Sephadex G-25凝膠層析進(jìn)一步分離純化。主要分析了洗脫流速

4、、上樣量以及樣品濃度對(duì)分離效果的影響，得到最佳凝膠層析條件為:以超純水為洗脫溶液，洗脫流速0.6 mL/min，上樣量2.0 mL，樣品濃度30 mg/mL。在此條件下可收集得到4個(gè)組分，其中洗脫峰Ⅱ有較高的ACE抑制效果，ACE抑制率為85％，IC50為0.021 mg/mL，該組分經(jīng)Tricine-SDS-PAGE測(cè)定分子量在3 kDa以下。
　　3.采用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定花椒籽蛋白酶解液超濾前后所得組分的氨基酸組成及其含量

5、，并研究5kDa的超濾膜截留液組分的功能特性及其穩(wěn)定性。結(jié)果表明:酶解產(chǎn)物、截留液、超濾液和層析液樣品中氨基酸組成較齊全，其中谷氨酸含量最高，分別為6.96％、6.58％、4.15％、0.69％;截留液在較寬的pH值(2.0～10.0)范圍內(nèi)溶解性良好，達(dá)到80％以上;有較高的吸油性，在溫度30～70℃范圍內(nèi)平均吸油性為4.0mL/g;在pH值2.0～10.0范圍內(nèi)起泡性呈先降低后升高的趨勢(shì)，但泡沫穩(wěn)定性正相反;乳化性隨著pH值的升高而

6、增大，但乳化穩(wěn)定性先降低后升高;截留液經(jīng)過(guò)63℃～95℃熱處理后ACE抑制率還能維持在48％以上，與原樣品(51.03％)差異不顯著(p＞0.05);在不同酸堿環(huán)境下ACE抑制率維持在47％左右;光照72 h后ACE抑制率由44％下降到40％，差異不顯著(p=0.12，p＞0.05);葡萄糖、乳糖和蔗糖對(duì)降血壓肽的影響較小，ACE抑制率無(wú)顯著性差異(p＞0.05)，保持在50％不變;花椒籽蛋白降血壓肽經(jīng)胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后，仍能保持