黃豆苷元代謝相關(guān)酶的分離提取及其酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、大豆異黃酮是大豆生長(zhǎng)過(guò)程中形成的一類次級(jí)代謝產(chǎn)物，雌馬酚是其主要苷元成分黃豆苷元在人體腸道菌群作用下的代謝產(chǎn)物之一，比異黃酮具有更高生物學(xué)活性。目前人們已篩選出一些能將黃豆苷元直接轉(zhuǎn)化為雌馬酚的菌株，它們首先將底物黃豆苷元轉(zhuǎn)化為二氫黃豆苷元，然后再將二氫黃豆苷元轉(zhuǎn)化為雌馬酚。但對(duì)于這些產(chǎn)雌馬酚菌來(lái)說(shuō)，只是比較系統(tǒng)的研究了它們的代謝途徑，參加代謝相關(guān)的酶學(xué)證據(jù)、酶和基因方面的研究極少。課題組前期從健康成人腸道中獲得一株可產(chǎn)雌馬酚的腸道菌S

2、lackia屬菌株HY-2，該菌株能將黃豆苷元直接轉(zhuǎn)化為雌馬酚。本研究以菌株HY-2和代謝途徑的中間產(chǎn)物二氫黃豆苷元為研究對(duì)象，對(duì)參與黃豆苷元到二氫黃豆苷元、二氫黃豆苷元到雌馬酚轉(zhuǎn)化的酶分別作了粗提取，并對(duì)提取條件作了優(yōu)化，然后研究了這兩種粗酶的性質(zhì)。其中黃豆苷元還原酶(Daidzein reductase)能夠催化黃豆苷元轉(zhuǎn)化為二氫黃豆苷元，二氫黃豆苷元-雌馬酚還原酶(Dihydrodaidzein-equolreductase)能夠

3、催化二氫黃豆苷元轉(zhuǎn)化為雌馬酚。主要結(jié)果如下:
　　 (1)研究了不同大豆食品對(duì)人體內(nèi)異黃酮代謝的影響。12名雌馬酚生產(chǎn)者在攝入不同苷元含量的大豆食品后，分別收集他們0～48h尿液并檢測(cè)了尿液中異黃酮含量，結(jié)果顯示尿液中雌馬酚、黃豆苷元及染料木黃酮排泄量差異不顯著，體內(nèi)異黃酮的代謝不受大豆食品中異黃酮苷元含量的影響。
　　 (2)黃豆苷元還原酶是一種誘導(dǎo)型胞外酶，對(duì)菌株HY-2產(chǎn)黃豆苷元還原酶的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，其結(jié)果為

4、:黃豆苷元添加量75μg/mL，培養(yǎng)基初始pH7.5，接種量6％，培養(yǎng)溫度34℃，培養(yǎng)時(shí)間12h。經(jīng)優(yōu)化培養(yǎng)后，二氫黃豆苷元含量達(dá)到2.78μg/mL左右，比優(yōu)化前提高20.9％。經(jīng)硫酸銨沉淀、透析脫鹽后，初步研究粗酶性質(zhì)為:最適反應(yīng)溫度35℃，最適pH值6.5，在pH值6.0～7.5之間最為穩(wěn)定，大多數(shù)金屬離子對(duì)其影響較小。
　　 (3)二氫黃豆苷元-雌馬酚還原酶是一種誘導(dǎo)型胞內(nèi)酶，在提取二氫黃豆苷元-雌馬酚還原酶過(guò)程中，對(duì)超