酵母細(xì)胞基因組中與鈣離子穩(wěn)態(tài)相關(guān)基因的功能研究.pdf

1、通過基因組規(guī)模的遺傳學(xué)篩選,我們鑒定出了120個對鈣離子敏感的釀酒酵母基因缺失株。這些基因的功能與細(xì)胞代謝、蛋白質(zhì)分選、離子穩(wěn)態(tài)、轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸、細(xì)胞周期和高滲脅迫應(yīng)答等方面相關(guān)。其中7個基因編碼ESCRT-I,-II,和-III蛋白復(fù)合物的成分,這些復(fù)合物的功能是形成能夠分選蛋白質(zhì)到液泡或溶酶體的多泡復(fù)合體(MVB)。在胞外鈣離子脅迫條件下,這些ESCRT缺失株的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度升高,并激活鈣調(diào)磷酸酯酶,但是編碼內(nèi)質(zhì)網(wǎng)/高爾基體膜

2、上的鈣泵基因PMR1的表達(dá)量卻降低了。之前的研究表明,在這些ESCRT缺失株中,Rim101蛋白不能被正常剪切。我們的研究證明,這些缺失株的鈣離子敏感性至少部分是由于Nrg1表達(dá)量的升高從而抑制了PMR1的表達(dá)引起的,并且這些菌株對鈣離子的敏感性可以被組成型激活型Rim101(C端缺失型)的表達(dá)所抑制。7個ESCRT缺失株背景下PMC1的敲除能夠增加ESCRT缺失株對鈣離子的敏感性,而PMR1的敲除則無明顯的影響。Nrg1在體外和體內(nèi)均