大豆抗氧化多糖制備表征及對輻射誘導(dǎo)氧化應(yīng)激抑制作用.pdf

1、隨著核技術(shù)的廣泛應(yīng)用，輻射傷害已滲透到各個領(lǐng)域。電離輻射產(chǎn)生過量的活性氧簇（ROS），攻擊生命大分子，所引發(fā)的氧化應(yīng)激與人類近百余種疾病密切相關(guān)。電離輻射導(dǎo)致的氧化損傷越來越受到人們的重視，篩選具有強抗氧化活性的天然產(chǎn)物成分已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和食品科學(xué)研究的熱點。本課題以大豆抗氧化多糖（Polysaccharides from soybean residue，SRP）為研究對象，系統(tǒng)性研究其制備工藝、分離純化方法、結(jié)構(gòu)表征、抗氧化、抗輻

2、射活性和對輻射誘導(dǎo)氧化應(yīng)激防護(hù)作用機制。
　　采用纖維素酶法降解豆渣制備可溶性 SRP，通過響應(yīng)面法（RSM）優(yōu)化得到酶法制備SRP的工藝條件：酶用量60 U/g、pH值5.10、溫度50℃，在此條件下，酶解1 h SRP得率為45.71％。通過活性跟蹤研究，確定酶解時間8 h SRP具有最佳抗氧化活性。
　　利用DEAE-52陰離子纖維素層析、Sephadex G-100葡聚糖凝膠層析對SRP進(jìn)行純化，制備得到中性大豆抗氧

3、化多糖SRP-1a。采用HPGPC、GC-MS、FT-IR高碘酸氧化-Smith降解和NMR技術(shù)對SRP-1a結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，研究發(fā)現(xiàn) SRP-1a為均一度較高的多糖，其分子量分布寬度Mw/Mn=1.19，重均分子量為3.89×103 Da。含有核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖等7種單糖組分，其摩爾比為0.82:0.97:2.77:0.63:6.38:70.62:17.82。SRP-1a的糖殘基構(gòu)型主要為1,4-β-D

4、-Glcp、1,3,6-α-D-Manp和1,4-α-D-Galp。主鏈?zhǔn)怯蒅lcp和Manp組成的甘露葡聚糖，(1→)-β-D-Glcp為主鏈的非還原性末端殘基，由1,3,6-α-D-Manp通過O-6位與1,4-α-D-Galp殘基構(gòu)成的側(cè)鏈相連。
　　通過體外抗氧化篩選模型，研究了SRP-1a清除生理自由基、非生理自由基、總還原能力、金屬離子螯合能力和抑制脂質(zhì)過氧化能力。結(jié)果表明，SRP-1a具有較強的傳遞氫原子能力，可以通

5、過提供氫原子直接清除羥基自由基（·OH）或終止自由基的鏈反應(yīng)，從而防止自由基誘導(dǎo)氧化損傷的發(fā)生。同時，SRP-1a具有較高的還原能力和金屬離子螯合能力，對于脂質(zhì)過氧化具有一定的抑制作用，并呈良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　建立X和60Coγ輻射誘導(dǎo)細(xì)胞損傷模型，研究SRP-1a對細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果表明，SRP-1a可以拮抗電離輻射損傷作用，提高輻射損傷小鼠脾細(xì)胞活力，降低小鼠脾細(xì)胞DNA的輻射損傷程度，增加細(xì)胞抗氧化酶活性，減少丙二醛

6、（MDA）含量。建立60Coγ輻射誘導(dǎo)氧化損傷動物模型，對SRP-1a的輻射防護(hù)作用進(jìn)行研究。結(jié)果表明，SRP-1a能減輕輻射造成小鼠免疫器官的損傷，顯著增加小鼠各臟器中超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，提高還原型谷胱甘肽（GSH）含量，降低MDA含量，有效激活抗氧化酶系，減少脂質(zhì)過氧化，減輕細(xì)胞膜的氧化損傷，降低小鼠外周血淋巴細(xì)胞異形和骨髓細(xì)胞微核率。
　　通過免疫組化和蛋白

7、免疫印跡技術(shù)（Western blot）對小鼠脾臟、肝臟組織線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號途徑主要相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，SRP-1a防護(hù)輻射誘導(dǎo)機體氧化損傷的作用機制是：SRP-1a通過提高 Bcl-2表達(dá)水平，抑制Bax表達(dá)的上調(diào)，降低胞漿Cyt-c表達(dá)，繼而降低凋亡酶caspase-3活化片段的表達(dá)，起到對輻射誘導(dǎo)細(xì)胞過度凋亡的抑制作用。
　　SRP-1a能夠改善由電離輻射誘導(dǎo)的氧化損傷，降低活性氧自由基的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)細(xì)胞