大豆異黃酮和皂苷提取工藝優(yōu)化及品種間分析.pdf

1、大豆是豆科植物 Glycinemax (L)Merr.的成熟種子.在世界各國(guó)的飲食結(jié)構(gòu)中占有重要地位.它含有許多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和活性成分，大豆主要成分為蛋白35％、脂肪16％～21％、碳水化合物23％～27％、水分和粗纖維15％左右：另有2％的皂苷和異黃酮等糖苷，其中異黃酮占0.1～0.5％左右。在我國(guó)是重要的食用油原料，食物中重要的蛋白質(zhì)來(lái)源，大豆中所含有的異黃酮和皂苷具有非常強(qiáng)的藥活性，可以治療和預(yù)防多種疾病，在食品和醫(yī)藥行業(yè)中應(yīng)用前景

2、廣泛，所以說(shuō)大豆是在營(yíng)養(yǎng)學(xué)和藥理學(xué)上都非常有意義的植物。吉林省是個(gè)產(chǎn)糧大省，其中大豆是主要作物之一，大豆產(chǎn)品的深加工和綜合利用具有極大的研究開(kāi)發(fā)潛力，而大豆異黃酮和皂苷的開(kāi)發(fā)利用更是目前的一個(gè)研究和開(kāi)發(fā)熱點(diǎn)。 以往的大豆異黃酮和皂苷提取往往側(cè)重于使用穿透能力比較強(qiáng)的甲醇等有機(jī)溶劑，而這些提取溶劑都帶有一定的毒性，為以后的工業(yè)化生產(chǎn)及人們的直接使用帶來(lái)不便。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了兩個(gè)獨(dú)立的提取工藝，第一個(gè)工藝流程是采用食用乙醇提取，經(jīng)實(shí)驗(yàn)分

3、析確定最佳的大豆異黃酮和皂苷提取工藝，再采用此提取條件使用高效液相色譜對(duì)8個(gè)有主要代表特征的大豆品種進(jìn)行了異黃酮含量進(jìn)行差異分析。采用超濾的方法對(duì)提取液進(jìn)行純化，去除蛋白質(zhì)，分析純化后的提取物中異黃酮的純度，之后使用冷凍干燥機(jī)凍干保存。 第二個(gè)提取工藝是采用熱水提取，經(jīng)實(shí)驗(yàn)分析得到最佳的大豆異黃酮和皂苷提取條件。但是水提取初提液中的溶出蛋白較多，嚴(yán)重干擾了檢測(cè)和后續(xù)工作。本文采用鹽析.等電點(diǎn)法先去除大部分粗蛋白質(zhì)，之后再使用超濾

4、純化提取液，完全的去除掉蛋白質(zhì)，再經(jīng)高效液相色譜分析提取物的純度，提取液冷凍干燥保存。 本文經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)最終確定了乙醇提取和水提取大豆異黃酮和皂苷的最佳條件，液相檢測(cè)條件，超濾系統(tǒng)的使用條件，及8個(gè)不同基因型大豆的異黃酮含量差異。其主要結(jié)論如下所示： 1.乙醇提取大豆異黃酮的最佳條件為：采用80％乙醇，提取溫度為80℃，提取時(shí)間為3h，固液比為1:15，提取2次。此條件提取異黃酮的提取率能達(dá)到0.47％以上。 2.水

5、提取大豆異黃酮的最佳條件為：提取溫度為70℃，固液比為1:18，提取時(shí)間1h，提取3次.此條件提取異黃酮的提取率可達(dá)到0.42％。 3.大豆皂苷乙醇提取的最佳條件是：采用70％的乙醇，提取溫度是80℃，提取時(shí)間是4h，固液比是1:18，提取2次。 4.水提取大豆皂苷的最佳條件是：采用的提取溫度是80℃，提取時(shí)間為2h，固液比是1:18，提取2次。 5.液相色譜的檢測(cè)條件為：采用Agilent1100液相色譜儀，流

6、動(dòng)相為甲醇/水/乙酸=28/71/1，甲醇的比例由28％-70％，時(shí)間為30min，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10ul。 6.超濾條件的確定：主要是確立所使用的膜包的規(guī)格，使之去除蛋白效果最好，而異黃酮的損失最少。經(jīng)過(guò)不同膜包的對(duì)比，最終確定熱水提取時(shí)使用的膜包為截留分子量在8K的，這時(shí)蛋白去除率可達(dá)100％，異黃酮的損失率為22.23％。乙醇提取時(shí)的膜包采用5K的，蛋白去除率可達(dá)100％，異