環(huán)境影響因子及抑菌劑對(duì)李斯特氏菌生長的影響.pdf

1、李斯特氏菌是常見的食源性致病菌，在自然界中廣泛存在，如水、土壤、植物等?？稍谑称飞a(chǎn)貯藏過程中導(dǎo)致感染和腐敗變質(zhì)，造成污染，并引起食物中毒和其他食源性疾病，影響人類健康。曾有報(bào)道被污染的食品包括奶及奶制品、肉制品包括豬肉、牛肉、羊肉、腌臘食品、水產(chǎn)品、新鮮蔬菜等植物性食品。目前李斯特氏菌感染已成為發(fā)展中國家和發(fā)達(dá)國家的首要食品安全問題，其中的單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌(簡稱單增李斯特氏菌)曾被世界衛(wèi)生組織列為20世紀(jì)90年代四大食源性致病

2、菌之一，人類感染后可導(dǎo)致腦膜炎，孕婦流產(chǎn)，敗血癥，腸胃炎等。李斯特氏菌可在高鹽，低溫，干燥等極端環(huán)境下生存，因此可通過多種途徑進(jìn)行傳播。
　　 本文首先針對(duì)單增李斯特氏菌ATCC7644的生長條件，應(yīng)用Design-Expert7.0軟件中的Box-Behnken設(shè)計(jì)，以pH、鹽度和溫度為響應(yīng)因子，以菌落對(duì)數(shù)值為響應(yīng)值建立了響應(yīng)曲面模型，獲得了單增李斯特氏菌ATCC7644的最優(yōu)生長條件，并通過牛奶接種模擬實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了響應(yīng)面分析結(jié)

3、果的準(zhǔn)確性。接著討論了幾種不同李斯特氏菌在不同培養(yǎng)條件下菌株間繁殖速度的差異性，發(fā)現(xiàn)在同一培養(yǎng)條件下，英諾克氏李斯特氏菌在培養(yǎng)4小時(shí)后即可成為體系中的優(yōu)勢菌株；本文還討論了常見食品添加劑山梨酸和山梨酸鉀對(duì)不同李斯特氏菌株及幾種食品中常見菌株的防腐效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)山梨酸對(duì)李斯特氏菌的防腐效果一般，山梨酸鉀對(duì)革蘭氏陰性菌的防腐效果優(yōu)于革蘭氏陽性菌。本研究的主要結(jié)果如下所示：
　　 1.食品中李斯特氏菌株的分離與鑒定
　　 從1

4、20份三種上海市常見食品中分離得到了16株李斯特氏菌，檢出率為13.33％。其中三文魚的檢出率為12.5％，蛤蜊為7.5％，咸肉為20％。經(jīng)革蘭氏染色，動(dòng)力實(shí)驗(yàn)，糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)和溶血實(shí)驗(yàn)鑒定，所分離所得菌株均為英諾克氏李斯特氏菌。
　　 2.響應(yīng)面法優(yōu)化單增李斯特氏菌ATCC7644的最佳生長條件
　　 根據(jù)不同pH、鹽度和溫度條件下單增李斯特氏菌ATCC7644的生長曲線，利用Design-Expert7.0軟件中的Box

5、-Behnken設(shè)計(jì)，建立了以菌落對(duì)數(shù)值(logCFU/mL)為響應(yīng)值的多元二次方程。響應(yīng)面分析結(jié)果顯示單增李斯特氏菌的最優(yōu)生長條件：pH8.0，鹽度為培養(yǎng)基本底鹽度0.5％，溫度為35.06℃。此外，在pH、鹽度和溫度3個(gè)影響因素中，pH對(duì)ATCC7644生長的影響最為顯著(P<0.0001)，其次是鹽度和溫度。牛奶接種單增李斯特氏菌(ATCC7644和19115)和英諾克李斯特分離菌株的模擬實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了響應(yīng)面分析的準(zhǔn)確性。

6、　　 3.不同生長條件下李斯特屬不同菌種間繁殖速度的差異性研究
　　 4株李斯特氏菌在5種不同液體培養(yǎng)基(TSB-YE，BHI，BLEB，LB，TSB)中的生長曲線顯示英諾克李斯特氏菌(ATCC33090)的繁殖速度快于單增李斯特氏菌(ATCC19114，19115和13932)，此差異性在培養(yǎng)4小時(shí)后更為顯著。英諾克李斯特氏菌和單增李斯特氏菌的混合培養(yǎng)模擬體系顯示混合菌體系中單增李斯特氏菌的生長易受到英諾克李斯特氏菌的抑制，

7、此結(jié)果對(duì)如何降低食品中單增李斯特氏菌的漏檢率具有重要意義。
　　 4.單增李斯特氏菌與其他常見食源性致病菌對(duì)山梨酸鉀的耐受差異性探討
　　 以食品中單增李斯特氏菌和2種常見的革蘭氏陽性菌(蠟樣芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌)與革蘭氏陰性菌(沙門氏菌、副溶血弧菌、熒光假單胞菌)為研究對(duì)象，針對(duì)純培養(yǎng)狀態(tài)和模擬食品體系進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示1g/L山梨酸鉀對(duì)革蘭氏陰性菌的抑菌效果比單增李斯特氏菌等革蘭氏陽性菌要高2倍以上。最小抑菌濃

8、度實(shí)驗(yàn)和即食海帶的接種模擬實(shí)驗(yàn)結(jié)果與純培養(yǎng)體系的結(jié)果相吻合，說明單增李斯特氏菌等革蘭氏陽性菌對(duì)山梨酸鉀的耐受性強(qiáng)于革蘭氏陰性菌。
　　 5.食品添加劑山梨酸對(duì)李斯特氏菌的抑制作用
　　 選擇了3株ATCC菌株和3株食品中來源的菌株，分別在純培養(yǎng)狀態(tài)，模擬接種鱈魚和模擬接種豬肉狀態(tài)下進(jìn)行了研究，并進(jìn)行了最小抑菌濃度實(shí)驗(yàn)。研究發(fā)現(xiàn)山梨酸對(duì)李斯特氏菌的抑制作用有限，生長平臺(tái)期時(shí)，純培養(yǎng)狀態(tài)下的抑制率為10％左右，模擬接種狀態(tài)下

9、的抑制率為5％左右；抑菌實(shí)驗(yàn)和MIC實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示，分離型的英諾克李斯特氏菌(分離自食品)對(duì)山梨酸的耐受性好于單增李斯特氏菌(ATCC19115和13932)。
　　 本文研究結(jié)果顯示單增李斯特氏菌在低溫(0-7℃)條件下基本不生長，高鹽(5-7％)體系中雖然繁殖速度受到抑制，但是可緩慢生長；當(dāng)溫度()25℃后其繁殖速度出現(xiàn)顯著性增加，而目前食品中常用的防腐劑山梨酸鉀和山梨酸對(duì)李斯特氏菌的抑制效果一般，因此，食品生產(chǎn)后，在運(yùn)輸、

10、流通和銷售過程中的溫度控制非常重要，低溫有利于單增李斯特氏菌的控制。此外，英諾克李斯特氏菌在培養(yǎng)過程中很容易成為優(yōu)勢菌株，因此，在檢測和分離鑒定食品中單增李斯特氏菌時(shí)建議先選擇在李斯特氏菌繁殖速度差異性較小的生長條件下進(jìn)行預(yù)增菌，如先在LB或TSB培養(yǎng)基下培養(yǎng)4小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到選擇性培養(yǎng)基中進(jìn)行分離檢測，這樣處理有利于減少單增李斯特氏菌的漏檢率。綜上所述，本文研究可為食品企業(yè)和監(jiān)管部門對(duì)李斯特氏菌的分離、檢測和控制提供理論依據(jù)，對(duì)單增李