長壽老人源雙歧桿菌優(yōu)良菌株的篩選及生理功能研究.pdf

1、目前,在中國乃至世界范圍內(nèi),優(yōu)良乳酸菌資源的開發(fā)和利用已成為熱點.該課題針對國內(nèi)外雙歧桿菌的研究現(xiàn)狀、存在的問題等,以世界第四長壽區(qū)—廣西巴馬百歲以上長壽老人源雙歧桿菌為試材,從優(yōu)良菌種的篩選、生物學特性研究、生理功能探討與驗證等方面進行了較為系統(tǒng)、全面的研究,以期為中國安全、優(yōu)質(zhì)、高效的食品雙歧桿菌發(fā)酵劑及活菌制劑的研制與開發(fā)提供理論依據(jù)、微生物資源及技術(shù)支持.具體從以下幾個方面展開研究工作:1.以人結(jié)腸腺癌細胞系HT-29細胞為試材

2、,對來源于長壽老人腸道的24株雙歧桿菌進行了體外黏附試驗.結(jié)果發(fā)現(xiàn),雙歧桿菌均具有一定的黏附能力,其中的TTF、Z2、TZ5、J-1菌株具有較高的黏附能力.進一步對4株初篩雙歧桿菌耐胃酸、膽汁酸和合成B族維生素能力的試驗發(fā)現(xiàn),雙歧桿菌TTF菌株不僅能合成較高的B<,1>、B<,2>、B<,6>、B<,12>等多種B族維生素,而且在pH3.0的條件下處理120min存活率達93.11﹪,同時在2﹪膽鹽濃度下處理24h有較好的存活,具有顯著

3、的綜合優(yōu)勢.通過形態(tài)學、生理生化等相關(guān)指標的鑒定該菌株為長雙歧桿菌.2.以篩選的長雙歧桿菌TTF菌株為試驗菌對其生長規(guī)律、最佳生長培養(yǎng)基、最適生長溫度、起始pH值、促生長因子等生物學特性進行了研究.結(jié)果發(fā)現(xiàn):1)長雙歧桿菌TTF菌株在MRS、改良MRS和PTYG三種培養(yǎng)基中的生長以改良MRS培養(yǎng)基為最佳.通常培養(yǎng)6h進入對數(shù)期,12h進入穩(wěn)定期,最適生長溫度為37℃,最適起始pH值為7.5,活菌數(shù)對數(shù)值最高可達9.72.2)某些食品原料

4、可作為雙歧因子選擇性促進雙歧桿菌的生長.3.對長雙歧桿菌TTF與HT-29細胞黏附的相關(guān)因素、與常見抗生素、中草藥的藥敏性、體外清除活性氧自由基能力、增強機體免疫功能、潤腸通便功能、維持和修復機體腸道正常菌群平衡作用等生理功能進行了較為全面的研究.研究結(jié)果為:1)以金黃色葡萄球菌ATCC 25923為質(zhì)控菌,長雙歧桿菌TTF對8類30種常用抗生素的藥敏性為對大環(huán)內(nèi)酯類、頭孢素類、青霉素類、β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的復合物及其他類的氯霉素、呋喃

5、妥因、利福平抗生素均敏感;對氨基糖苷類、糖肽類抗生素均耐藥;對四環(huán)素類抗生素表現(xiàn)出不同的藥敏性.長雙歧桿菌TTF菌株經(jīng)質(zhì)粒DNA的檢測發(fā)現(xiàn)不含有質(zhì)粒,說明其對藥物的耐受性不為質(zhì)粒編碼,該菌不存在耐藥因子傳遞的危險,可作為發(fā)酵食品或活菌制劑用安全菌種使用.2)三類不同藥效的中草藥對長雙歧桿菌TTF體外生長的影響是不同的,除補益類中藥可顯著中進其生長外(P<0.05),清熱解毒類中藥在1﹪、5﹪和10﹪三個試驗濃度下隨著濃度的增加抑制作用增

6、強但均未達到顯著性差異(P>0.05),而瀉下類中藥對受試菌均有顯著的抑制作用(P<0.05)且大黃和芒硝達到極顯著水平(P<0.01).3)長雙歧桿菌TTF對HT-29細胞具有很強的黏附能力,其黏附作用受細菌濃度、細菌與細胞相互用用時間、溫度和pH值等的影響,并在一定范圍內(nèi)具有依賴性.胰蛋白酶處理雙歧桿菌TTF表面結(jié)構(gòu)可導致其黏附的降低,說明長雙歧桿菌TTF菌體表面的蛋白質(zhì)可能是細菌黏附素的主要組成成分.4)在模型組成立的前提下,三組

7、受試物組的小鼠首次排黑便時間、排便重量二項指標均極顯著優(yōu)于模型對照組和陰性對照組(P<0.01),但排便粒數(shù)沒有明顯的差異.5)長雙歧桿菌TTF不同處理物灌胃鹽酸林可霉素(LH)造成的菌群失調(diào)小鼠后可使腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳桿菌極顯著增加(P<0.01),產(chǎn)氣莢膜梭菌顯著降低(P<0.05),腸桿菌、擬桿菌、腸球菌極顯著降低(P<0.01),說明該雙歧桿菌無論LB、IE還是SCS均可起到修復與調(diào)節(jié)機體腸道微生態(tài)平衡的作用.6)長雙歧桿菌TT

8、F三種受試物對環(huán)磷酰胺(Cy)造成的IDMM三項免疫指標均有顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)影響,在該試驗選取的三個劑量范圍內(nèi)基本呈量效關(guān)系.7)采用比色法、微量發(fā)光法和ESR法對長雙歧桿菌TTF不同處理物體外清除活性氧自由基能力的研究結(jié)果表明,三種處理物均有一定的清除·OH和O<,2><'->的能力,且在該試驗條件下與對照組相比達顯著性差異(P<0.05),但不同的處理物組對兩種氧自由基的清除能力不同,具體表現(xiàn)為SCE>I