慶大霉素單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用.pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文慶大霉素單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用姓名：徐亭申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：王捍東;王宗元20050501A B S T R A C TA m i n o g l y c o s i d e s a n t i b i o t i c s a r e f r e q u e n t l y u s e da n t i b i o t i c s w i t hb r o a d s p e c t r

2、u m o fa n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y , m o s t l y i n c l u d i n g G e n t a m i c i n ( G M ) ，S t r e p t o m y c i n ( S M ) a n dK a n a m y c i n ( 1 【M ) e t c ．T h e y a r ev e r yu s e f u l t ot r

3、e a tC O W m a s t i t i sa n de n d o m e t r i t i s ，a n da r ef r e q u e n t l y a d d e di n t o f e e d s f o rt h e p r e v e n t i o n o r t r e a t m e n t so fa n i m a ld i s e a s e s ．H o w e v e r , i l l

4、e g a la d m i n i s t r a t i o nw i l l l e a dt o r e s i d u e s i ne d i b l et i s s u e s ，e s p e c i a l l yi n t h em i l ko f g a l a c t o p h o r o u sa n i m a l s ，a n d f i n a l l yd ol a t e n th a r m

5、t o h u m a n h e a l t h ，r e s u l t i n gi nh e a r i n gt o x i c i t y a n dk i d n e yt o x i c i t y ．M a n y c o u n t r i e sa n di n t e r n a t i o n a l o r g a n i z a t i o n sh a v ee s t a b l i s h e d t

6、 h em a x i m u mr e s i d u el i m i to fa m i n o g l y c o s i d e s a n t i b i o t i c si n a n i m a lt i s s u e s f o r h u m a nc o n s u m p t i o n ．A n dt h e t o l e r a n c e l i m i t o fG e n t a m i c i

7、n i n m i l k i sO ．2 m g ／Li nC h i n a ．M a n y c h e m i c a la n d p h y s i c sm e t h o d sf o rd e t e c t i n gG e n t a m i c i nr e s i d u e di n e d i b l et i s s u e so f a n i m a l sh a v eb e e ne s t a

8、b l i s h e d ．T h o u g hs o m e o f t h e s e m e t h o d sa r es e n s i t i v ea n da c c u r a t e ，t h e ya r e n o ts u i t a b l e f o rs c r e e n i n g al a r g en u m b e ro fs a m p l e sb e c a u s et h e s

9、e m e t h o d s a r e t i m e ·c o n s u m p t i o n ，c o s t l y a n d h i g h l y s k i l l e d ．E n z y m e —l i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y ( E L I S A ) a sa r a p i d ，s p e c i a l a n ds e n s

10、i t i v eb i o l o g i c a l m e t h o d ，i sg r a d u a l l ya p p l i e d i n d r u g r e s i d u e s a s s a y ．T h i sr e s e a r c h s y n t h e s i z e dt h e a n t i g e n a n dd e v o l o p e d t h ea n t i b o d

11、 i e s ，a n de s t a b l i s h e d t h eE L I S A m e t h o df o r d e t e c t i n gG M ．I nt h es i m u l a t i v ee x p e r i m e n t ，t h e r e s i d u e so f G M i nm i l kw e r e d e t e c t e d ．T op r e p a r em o

12、 n o c l o n a la n t i b o d i e s ( m A b s ) a g a i n s tG M ，i tW a s b o u n d t o B S A o rH S A u s i n g E D C a st h e c o u p l i n gr e a g e n t ，a n di d e n t i f i e d t h ec o n j u g a t i o n b yS D S

13、- P A G E ．T h ea m i d o e y a n o g e n o fG M W a s l i n k e d t o c a r b o x y lo fc a r r i e rp r o t e i nt e r m i n a lv i at h ec o u p l i n gr e a g e n t ，w h i c ha r e s p e c i f i c f o r i n d i v i d

14、 u a lG M w e r er e a d i l y e x p o s e dt o t h ei m m u n es y s t e m a n dt h i s r e s u l t e d i n t h ep r o d u c t i o n o fa n t i b o d i e s t h a t w e r eh i g h l ys p e c i f i cf o rt h e h a p t e n

15、 ．M i c e ( B A L B ／c ) w e r ei m m u n i z e ds u b c u t a n e o u s l y ( s c ) w i t hG M - B S A c o n j u g a t e s ．A f t e r t h r e eb o o s t e ri n j e c t i o n s ，t h em i c e w e r e p r i m e dw i t h a

16、f i n a l b o o s t e ri n j e c t i o n( i n t r a p e r i t o n e a l l y ) ．．T h r e ed a y s l a t e r , s p l e e nc e l l sw e r e i s o l a t e d ．T h ef l e s hs p l e e n c e l lw a su s e df o rf u s i o nw i t

17、 hm y e l o m ac e l l ．i E L I S A a n d C i E L I S A w e r ee m p l o y e d t o s c r e e nt h ep o s i t i v e c e l l ．T h ep o s i t i v e c e l l sw e r ec l o n e db y l i m i t i n gd i l u t i o n s ( t h r e e