STAMP2與糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：
　　2型糖尿病大血管病變的主要病理改變是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)，而動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂所導(dǎo)致的急性冠脈綜合征(ACS)則是糖尿病患者心臟事件的豐要原因。但是，糖尿病患者冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重、易損斑塊發(fā)生率高的機(jī)制目前尚未完全闡明。因此，急性心血管病事件作為威脅人類生命的頭號(hào)殺手，其防治已成為世界性公共衛(wèi)生的重點(diǎn)和難題。因此積極而深入研究這一機(jī)制具有非常重要的意義。
　　胰島素抵抗(insul

2、inresistance，IR)作為2型糖尿病的基本特征，能夠引起糖脂代謝的紊亂，從而增加動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和不穩(wěn)定。分析糖尿病猝死患者的冠狀動(dòng)脈的病理結(jié)構(gòu)后可以發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂處存在大量凋亡的巨噬細(xì)胞，而遠(yuǎn)離動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂處的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象并不明顯。因此，巨噬細(xì)胞的凋亡特別是晚期凋亡可以導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的破裂，繼發(fā)血栓形成，最終引起急性冠脈綜合征。巨噬細(xì)胞凋亡的信號(hào)調(diào)控中Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子是關(guān)鍵一步。Akt信號(hào)

3、通路的障礙能導(dǎo)致巨噬細(xì)胞糖耐量異常、胰島素抵抗和發(fā)生凋亡。因此發(fā)生胰島素抵抗的巨噬細(xì)胞更易發(fā)生凋亡，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，激活A(yù)kt1的特殊治療可能會(huì)增加動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性，減少動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成;但進(jìn)一步的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:Akt1的減少能降低巨噬細(xì)胞對(duì)低密度脂蛋白(LDL)的攝取，意味著Akt1可能有致動(dòng)脈粥樣硬化作用。PI3K/Akt通路的激活能增加病變處巨噬細(xì)胞的存活，但持續(xù)的激活能促進(jìn)動(dòng)脈粥樣

4、硬化的發(fā)生。綜上所述，我們需要一個(gè)關(guān)鍵分子通過(guò)調(diào)控胰島素抵抗通路進(jìn)而精確調(diào)控Akt分子的活性。即這一分子能調(diào)節(jié)細(xì)胞的正常糖代謝，缺乏該分子時(shí)能夠?qū)е乱葝u素抵抗的發(fā)生，同時(shí)其產(chǎn)物活性亦受胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)的調(diào)節(jié)。這一關(guān)鍵分子即是本研究的焦點(diǎn)所在。
　　有研究表明，六跨膜蛋白STAMP2可能就是滿足這些條件的關(guān)鍵分子。STAMP2，最初被命名為前列腺跨膜上皮抗原(six-transmembraneepithelialantigenofpr

5、ostate4，STEAP)。STAMP2可參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的糖代謝，缺失時(shí)引起Akt信號(hào)通路受損和胰島素胞外分泌過(guò)程受損，導(dǎo)致細(xì)胞的糖代謝受損和胰島素抵抗。此外STAMP2能在人和小鼠的動(dòng)脈硬化斑塊中表達(dá)，能調(diào)控巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞，推動(dòng)小鼠動(dòng)脈硬化的進(jìn)程。可見，STAMP2在胰島素抵抗和易損斑塊的形成中起橋梁性作用。對(duì)此，我們提出STAMP2/Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑可能是在糖尿病狀態(tài)下胰島素抵抗、巨噬細(xì)胞凋亡和易損斑塊形成的共同中間環(huán)節(jié)的設(shè)

6、想。
　　在這項(xiàng)研究中，我們以2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠作為模型動(dòng)物，研究在體情況下，STAMP2對(duì)Akt信號(hào)途徑和巨噬細(xì)胞凋亡的影響以及穩(wěn)定2型糖尿病易損斑塊的可行性，進(jìn)一步揭示STAMP2基因的生物學(xué)功能，為今后尋找相應(yīng)的靶點(diǎn)治療打下研究基礎(chǔ)，為降低斑塊易損性提供臨床治療上的理論依據(jù)。
　　目的：
　　1.建立2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型;
　　2.構(gòu)建STA

7、MP2過(guò)表達(dá)重組腺病毒載體，合成STAMP2過(guò)表達(dá)腺病毒;
　　3.將2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染STAMP2過(guò)表達(dá)重組腺病毒后，觀察在整體功能水平、組織學(xué)水平上，STAMP2基因過(guò)表達(dá)后穩(wěn)定2型糖尿病易損斑塊的作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　方法：
　　1.STAMP2過(guò)表達(dá)腺病毒的合成:
　　根據(jù)小鼠STAMP2基因序列(Genebank)，設(shè)計(jì)合成引物，克隆小鼠STAMP2mRNA，PC

8、R擴(kuò)增STAMP2基因，回收目的基因并亞克隆至表達(dá)載體，經(jīng)測(cè)序鑒定正確后，應(yīng)用BDAdeno-XTMExpressionSystem2腺病毒載體構(gòu)建系統(tǒng)，構(gòu)建含小鼠STAMP2基因的腺病毒質(zhì)粒。經(jīng)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞行病毒包裝、擴(kuò)增及純化，得到小鼠STAMP2過(guò)表達(dá)腺病毒;
　　2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):
　　(1)2型糖尿病動(dòng)物模型的建立:
　　3周齡雄性ApoE-/-/LDLR-/-小鼠40只，適應(yīng)性喂養(yǎng)24h后，隨機(jī)分為普通飲食組

9、(n=20)和糖尿病組(n=20)。兩組小鼠禁食12h后，進(jìn)行IPGTT。至兩組小鼠9周齡時(shí)，再次進(jìn)行IPGTT，糖尿病組小鼠出現(xiàn)胰島素抵抗的個(gè)體可給予一次性腹腔注射小劑量的STZ75mg/kg。2周后檢測(cè)IPGTT，出現(xiàn)隨機(jī)血糖≥11.1mmol/L的糖尿病組小鼠可作為2型糖尿病成模的動(dòng)物入組;
　　(2)小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染STAMP2過(guò)表達(dá)腺病毒:
　　兩組小鼠20周齡時(shí)，按照不同干預(yù)措施再次分組。普通飲食組隨機(jī)分為:普通飲食

10、空載體組(n=10)和普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組(n=10);糖尿病組隨機(jī)分為:糖尿病空載體組(n=10)和糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組(n=10)。普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組和糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組小鼠經(jīng)頸靜脈注射STAMP2過(guò)表達(dá)腺病毒;普通飲食空載體組和糖尿病空載體組小鼠經(jīng)頸靜脈注射對(duì)照空載體腺病毒。兩周后，追加相同劑量的過(guò)表達(dá)腺病毒和對(duì)照空載體腺病毒。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至小鼠24周齡時(shí)，留取小鼠腹腔原代巨噬細(xì)胞，球后血液及組

11、織后處死動(dòng)物;
　　(3)小鼠體重的稱量:
　　使用小動(dòng)物稱量?jī)x定期監(jiān)測(cè)小鼠體重的變化并記錄數(shù)據(jù);
　　(4)小鼠腹腔葡萄糖耐量試驗(yàn)(IPGTT):
　　小鼠空腹10-16h，按照1.5g/kg體重給予小鼠腹腔注射葡萄糖，分別于注射后0min、15min、30min、60min和120min斷尾取血檢測(cè)血糖;
　　(5)小鼠血液生化指標(biāo)檢測(cè):
　　各組小鼠在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)留取球后血液，離心后分別檢測(cè)空腹血

12、清葡萄糖(FBG)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、游離脂肪酸(FFA)的水平，Elisa法檢測(cè)血清胰島素水平，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù);
　　(6)小鼠頭臂干斑塊的病理學(xué)檢測(cè):
　?、俅篌w油紅O染色法觀察各組小鼠主動(dòng)脈斑塊負(fù)荷情況;
　　②HE染色、油紅O染色、Masson染色法和天狼猩紅染色測(cè)量小鼠頭臂干動(dòng)脈斑塊斑塊的面積、脂質(zhì)含量、膠原含量及Ⅰ型膠原與Ⅲ型膠原的比值;
　?、勖庖呓M化方法檢測(cè)小鼠頭臂干斑塊內(nèi)巨

13、噬細(xì)胞(MOMA-2)、平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-actin)的含量，計(jì)算易損指數(shù);
　?、躎UNEL法檢測(cè)小鼠頭臂干斑塊內(nèi)的細(xì)胞凋亡量以及巨噬細(xì)胞的凋亡量;
　　(7)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能的檢測(cè):
　　分離并培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的粘附功能、遷移功能、吞噬功能和凋亡情況;
　　3.小鼠主動(dòng)脈STAMP2mRNA表達(dá)量的檢測(cè):
　　Trizol法提取小鼠主動(dòng)脈STAMP2RNA，逆轉(zhuǎn)錄后，利用

14、SYBRGREEN法檢測(cè)各組小鼠主動(dòng)脈STAMP2mRNA的表達(dá)量;
　　4.小鼠主動(dòng)脈STAMP2蛋白表達(dá)量的檢測(cè):
　　取小鼠新鮮整根主動(dòng)脈約20mg，提取蛋白質(zhì)，Westernblot檢測(cè)斑塊內(nèi)STAMP2、Akt、p-Akt、caspase-3和Bcl-2的蛋白表達(dá)量;
　　結(jié)果：
　　1.動(dòng)物造模:
　　3周齡雄性ApoE-/-/LDLR-/-小鼠40只，隨機(jī)分為普通飲食組和糖尿病組。普通飲食組飼

15、以基礎(chǔ)飼料，糖尿病組飼以高糖高脂飲食。6周后測(cè)IPGTT;出現(xiàn)胰島素抵抗的小鼠一次性腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(STZ)。11周齡時(shí)測(cè)IPGTT，隨機(jī)血糖≥11.1mmol/L的糖尿病組小鼠作為2型糖尿病成模的動(dòng)物入組。
　　①糖耐量實(shí)驗(yàn)(IPGTT)結(jié)果:
　　ApoE-/-/LDLR-/-小鼠3周齡時(shí)，與普通飲食組相比，糖尿病組的IPGTT結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);ApoE-/-/LDLR-/-小鼠9周齡時(shí)，與普通

16、飲食組相比，糖尿病組的IPGTT結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05），血糖曲線下面積(AUC)明顯增加（P＜0.05）;ApoE-/-/LDLR-/-小鼠11周齡時(shí)，普通飲食與糖尿病組的IPGTT結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），血糖曲線下面積(AUC)亦明顯增加（P＜0.05）。普通飲食組小鼠不同周齡的IPGTT結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);糖尿病組小鼠不同周齡的IPGTT結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

17、>　?、隗w重變化情況:
　　ApoE-/-/LDLR-/-小鼠3周齡時(shí)，普通飲食組和糖尿病組小鼠的體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);高脂高糖飲食和基礎(chǔ)飲食分別喂養(yǎng)6周后，兩組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重均明顯增加。與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;注射鏈脲佐菌素后2周，糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小

18、鼠體重增加速度減慢，此時(shí)，與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠的體重?zé)o明顯增加，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);以高脂高糖飲食繼續(xù)喂養(yǎng)ApoE-/-/LDLR-/-小鼠至20周齡時(shí)，與普通飲食組小鼠相比，糖尿病組小鼠的體重明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);隨后ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重繼續(xù)增加，至22周齡時(shí)達(dá)到最大值，糖尿病組小鼠體重仍然明顯大于普通飲食

19、組小鼠體重，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;至ApoE-/-/LDLR-/-小鼠24周齡時(shí)，普通飲食組小鼠和糖尿病飲食組小鼠的體重均略有下降，但是糖尿病組小鼠體重仍然明顯大于普通飲食組小鼠的體重，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　?、壑鲃?dòng)脈斑塊負(fù)荷情況:
　　24周齡ApoE-/-/LDLR-/-小鼠經(jīng)高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素后，主動(dòng)脈斑塊負(fù)荷嚴(yán)重，結(jié)果表明此糖尿病小鼠模型能夠發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。

20、　　2.STAMP2過(guò)表達(dá)腺病毒轉(zhuǎn)染
　?、賁TAMP2過(guò)表達(dá)腺病毒載體構(gòu)建、合成:
　　利用BDAdeno-XTMExpressionSystem2腺病毒構(gòu)建系統(tǒng)，構(gòu)建出包含小鼠STAMP2基因的腺病毒載體(pLP-Adeno/STAMP2)并包裝到病毒上，經(jīng)腺病毒包裝，擴(kuò)增，純化后得到滴度為2×1011PFU/mL的腺病毒。
　　②STAMP2過(guò)表達(dá)腺病毒轉(zhuǎn)染:
　　在ApoE-/-/LDLR-/-小鼠20周

21、齡時(shí)，將普通飲食組和糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠各分為普通飲食空載體組（Control+Vehicle組）(n=10)、普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組（Control+STAMP2組）(n=10)、糖尿病空載體組（DM+Vehicle組）(n=10)、糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組（DM+STAMP2組）(n=10)。普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組和糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠經(jīng)頸靜脈注射S

22、TAMP2重組過(guò)表達(dá)腺病毒5×109PFU/只，普通飲食空載體組及糖尿病空載體組注射相同劑量的空載體病毒，2周后以相同劑量補(bǔ)充注射一次。腺病毒注射4周后處死動(dòng)物并留取標(biāo)本。
　　糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠主動(dòng)脈STAMP2mRNA表達(dá)量與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，明顯減少（P＜0.01）;普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠主動(dòng)脈STAMP2mRNA表

23、達(dá)量與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，雖然增加(P=0.22)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠主動(dòng)脈STAMP2mRNA表達(dá)量與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，明顯增加（P＜0.05）。
　　3.一般情況的改變:
　　在ApoE-/-/LDLR-/-小鼠22周齡時(shí)，糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重與普通空載體

24、組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，明顯增高（P＜0.01）;普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重與普通空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，略有下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，也略有下降，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　在ApoE-/-/LDL

25、R-/-小鼠24周齡時(shí)，糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重與普通空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，明顯增高（P＜0.05）;普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重與普通空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，略有增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠

26、相比，略有下降，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠血糖水平、胰島素抵抗指數(shù)和總膽固醇水平均明顯升高(P均＜0.001)，血清胰島素水平、甘油二酯水平和游離脂肪酸水平增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）;與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-

27、/-小鼠血糖、血清胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），但是小鼠血清總膽固醇、甘油三酯和游離脂肪酸水平增加，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）;與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠血糖、血清胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)明顯降低（P均＜0.01），血清總膽固醇、甘油三酯和游離脂肪酸水平略有降低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05

28、）。
　　4.頭臂干斑塊的病理學(xué)改變情況:
　　糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊面積、斑塊內(nèi)脂質(zhì)含量和斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞含量明顯升高(P均＜0.001);糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊面積、斑塊內(nèi)脂質(zhì)含量和斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞含量明顯降低（P均＜0

29、.001）;普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊面積、斑塊內(nèi)脂質(zhì)含量明顯降低（P均＜0.01），斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞含量略有降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊內(nèi)膠原含量和平滑肌含量明顯降低（P均＜0.01）

30、，頭臂干動(dòng)脈斑塊Ⅰ型和Ⅲ型膠原比值略有降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊內(nèi)膠原含量和Ⅰ型和Ⅲ型膠原比值明顯增加（P均＜0.05），頭臂干動(dòng)脈斑塊內(nèi)平滑肌含量略有增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/L

31、DLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊內(nèi)Ⅰ型和Ⅲ型膠原比值和平滑肌含量明顯增加(P均＜0.001)，頭臂干動(dòng)脈斑塊內(nèi)膠原含量略有增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊易損指數(shù)明顯升高（P＜0.001）;糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/

32、-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊易損指數(shù)降低（P＜0.001）;普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊易損指數(shù)降低(P＜0.05)。
　　5.頭臂干斑塊內(nèi)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞凋亡情況:
　　糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊的細(xì)胞凋亡明顯升高（P＜0.001

33、）;糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊的細(xì)胞凋亡降低（P＜0.001）;普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊細(xì)胞凋亡降低(P＜0.001)。
　　糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/

34、-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊的巨噬細(xì)胞凋亡明顯升高(P＜0.001);糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊的巨噬細(xì)胞凋亡降低（P＜0.001）;普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，頭臂干動(dòng)脈斑塊巨噬細(xì)胞凋亡降低(P＜0.01)。
　　6.STAMP2/A

35、kt信號(hào)通路表達(dá)情況:
　　糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，主動(dòng)脈血管內(nèi)STAMP2蛋白質(zhì)表達(dá)明顯減少(P＜0.01)，Akt磷酸化程度降低(P＜0.001)，caspase-3蛋白表達(dá)增多(P＜0.001)，抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)減少（P＜0.01）。
　　糖尿病+STAMP2過(guò)表達(dá)ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與糖尿病空載體組ApoE-/-/

36、LDLR-/-小鼠相比，血管內(nèi)STAMP2蛋白質(zhì)表達(dá)明顯增加（P＜0.001），Akt磷酸化程度增加（P＜0.001），caspase-3蛋白表達(dá)降低（P＜0.001），Bcl-2蛋白表達(dá)增加(P＜0.001);
　　普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，血管內(nèi)STAMP2蛋白質(zhì)表達(dá)明顯增加（P＜0.001），Akt磷酸化程度增加（P＜0.05），c

37、aspase-3表達(dá)降低（P＜0.001;），Bcl-2表達(dá)增加(P＜0.001)。
　　7.小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能的情況:
　　糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，腹腔原代巨噬細(xì)胞粘附功能、遷移功能、吞噬功能明顯增強(qiáng)，凋亡比例明顯增加（P均＜0.05）。
　　與糖尿病空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，經(jīng)過(guò)STAMP2腺病毒轉(zhuǎn)染后的糖尿病+S

38、TAMP2組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠，其巨噬細(xì)胞粘附功能明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，遷移功能明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），吞噬功能顯著增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，凋亡比例明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　經(jīng)過(guò)STAMP2過(guò)表達(dá)腺病毒轉(zhuǎn)染后，與普通空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，普通飲食+STAMP2過(guò)表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠，

39、其腹腔原代巨噬細(xì)胞粘附功能略有降低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），遷移功能明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，吞噬功能明顯增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），巨噬細(xì)胞凋亡比例明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)3周齡雄性ApoE-/-/LDLR-/-小鼠給予高熱量飲食喂飼和小劑量STZ注射后，建立2型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊小鼠模型;
　　(2)ApoE-/-/L

40、DLR-/-小鼠經(jīng)高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿病后，符合2型糖尿病代謝特點(diǎn)，與人類的糖尿病狀態(tài)基本類似;
　　(3)經(jīng)過(guò)STAMP2腺病毒轉(zhuǎn)染后，小鼠的體重和糖耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果降低，胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)得到改善;
　　(4)經(jīng)過(guò)STAMP2腺病毒轉(zhuǎn)染后，小鼠的一般代謝指標(biāo)檢測(cè)均有不同程度降低，血脂紊亂狀況得到有效改善;
　　(5)經(jīng)過(guò)STAMP2腺病毒轉(zhuǎn)染后，小鼠頭臂干處斑塊面積減小、脂質(zhì)含量降低、巨噬細(xì)胞凋亡減少、