JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在高氧肺損傷中的作用.pdf

1、目的:高氧機(jī)械通氣治療是臨床中搶救危重病人最有效的方法之一，然而長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)吸入高濃度氧可導(dǎo)致肺氧化應(yīng)激性損傷，目前對(duì)高氧肺損傷的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，因而臨床上尚無(wú)確定有效的防治方法。高氧肺損傷的一個(gè)重要組織學(xué)特點(diǎn)是細(xì)胞凋亡。c-Jun氨基末端激酶(C-Jun NH<,2>-terminal kinase，JNK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein Nnase，MAPKs)家族中的重要通

2、路之一，對(duì)細(xì)胞的凋亡調(diào)節(jié)發(fā)揮著重要作用。本課題采用幼鼠建立高氧肺損傷動(dòng)物模型，觀察高氧下肺組織細(xì)胞凋亡及JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活的時(shí)空分布特征，并探討JNK信號(hào)通路對(duì)高氧誘導(dǎo)的肺細(xì)胞凋亡的影響，從而研究JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在高氧肺損傷中的作用。 方法: 3 周Wistar大鼠48只采用隨機(jī)圖標(biāo)法分為6組，每組8只：空氣對(duì)照組、高氧暴露3天組、高氧暴露7天組、高氧暴露14天組、空氣+SP600125干預(yù)組、高氧暴露7天+SP60012

3、5干預(yù)組。高氧組持續(xù)吸入高濃度氧(O<,2>>95％)，空氣對(duì)照組置于室內(nèi)空氣中(O<,2>≈21％)。SP600125干預(yù)組動(dòng)物經(jīng)腹腔注射SP600125 30mg/kg，2h后再予高氧或空氣暴露。采用肉眼及蘇木精和伊紅(Hematoxylin and eosin，HE)染色光鏡下觀察肺組織病理學(xué)變化，末端標(biāo)記法(Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end la

4、beling，TUNEL)分析肺組織細(xì)胞凋亡的變化，免疫組化檢測(cè)肺組織磷酸化-JNK (p-JNK)的表達(dá)和分布，蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)肺組織p-JNK蛋白質(zhì)的含量。 結(jié)果:肺組織病理學(xué)改變表現(xiàn)為高氧3天時(shí)肺組織充血、水腫、出血和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，高氧7天時(shí)上述改變更加明顯，高氧14天時(shí)則肺組織充血水腫減輕，間質(zhì)增厚，成纖維細(xì)胞增生明顯。TUNEL 分析表明空氣對(duì)照組肺組織中少見(jiàn)凋亡細(xì)胞，而高氧暴露3天、7

5、天、14天組肺組織中可見(jiàn)大量的凋亡細(xì)胞(P<0.05)，尤以高氧暴露3、7天明顯；凋亡細(xì)胞以肺泡上皮細(xì)胞、小氣道上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞為主，部分巨噬細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞、浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞也呈凋亡改變。免疫組化結(jié)果提示空氣對(duì)照組偶有少量p-JNK陽(yáng)性表達(dá)，而高氧暴露組則p-JNK陽(yáng)性表達(dá)顯著增多，以高氧7天組增多最為明顯；陽(yáng)性細(xì)胞廣泛分布于肺泡上皮細(xì)胞、小氣道上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞以及浸潤(rùn)炎癥細(xì)胞。Western blot結(jié)果

6、顯示空氣對(duì)照組僅有少量p-JNK蛋白表達(dá)，高氧暴露3天、7天、14天組p-JNK蛋白表達(dá)含量明顯增加(P<0.05)，以在高氧7天組增加最為明顯。在空氣和高氧暴露7天，SP600125干預(yù)后肺組織p-JNK蛋白表達(dá)含量較相應(yīng)未干預(yù)組均出現(xiàn)明顯抑制(P<0.05)，且在高氧暴露7天，SP600125干預(yù)后顯著減少了肺組織細(xì)胞的凋亡(P<0.05)。 結(jié)論: 1．我們成功復(fù)制出高氧性肺損傷動(dòng)物模型。 2．高氧在肺損傷