無(wú)乳鏈球菌和化膿性鏈球菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)抗生素的耐藥性及耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分無(wú)乳鏈球菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)抗生素耐藥性及耐藥機(jī)制的研究
　　目的:
　　研究分離自浙江和臺(tái)灣地區(qū)無(wú)乳鏈球菌的耐藥性的差異以及喹諾酮不敏感無(wú)乳鏈球菌的耐藥機(jī)制，為臨床上合理使用抗菌藥物提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　采用Vitek2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定和藥敏系統(tǒng)對(duì)無(wú)乳鏈球菌進(jìn)行鑒定，并用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionizati

2、onTimeof Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS)進(jìn)行確認(rèn)。采用Vitek2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定和藥敏系統(tǒng)對(duì)菌株MIC進(jìn)行測(cè)定，統(tǒng)計(jì)細(xì)菌對(duì)9種抗生素的敏感率，并用卡方檢驗(yàn)和fisher確切概率法對(duì)兩地區(qū)的敏感率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用PCR分別擴(kuò)增喹諾酮類(lèi)耐藥菌株的parC和gyrA基因，并進(jìn)行測(cè)序和序列分析。
　　結(jié)果:
　　本研究共收集60株無(wú)乳鏈球菌，30株來(lái)自于臺(tái)灣地區(qū)，

3、30株來(lái)自于浙江地區(qū)。其中45株來(lái)自待產(chǎn)產(chǎn)婦和正常體檢婦女的陰道及陰道后穹隆分泌物標(biāo)本，7株來(lái)自待產(chǎn)產(chǎn)婦的羊水，2株來(lái)自精液，6株來(lái)自尿液。臺(tái)灣地區(qū)和浙江地區(qū)分離的無(wú)乳鏈球菌對(duì)青霉素敏感率分別為96.7％和100.0％，對(duì)頭孢吡肟敏感率分別為86.7％和93.3％，對(duì)紅霉素敏感率均為13.3％，對(duì)左氧氟沙星敏感率均為70.0％，兩地區(qū)無(wú)乳鏈球菌對(duì)9種抗生素的敏感率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。18株左氧氟沙星不敏感菌株中14株無(wú)乳鏈球菌的parC或g

4、yrA基因存在突變，突變類(lèi)型以parC基因的Ser79Tyr和gyrA基因的Ser81Leu突變?yōu)橹鳌?br>　　結(jié)論:
　　臺(tái)灣和浙江地區(qū)分離的無(wú)乳鏈球菌對(duì)臨床常用抗生素的敏感率相似。分離自臺(tái)灣和浙江的左氧氟沙星不敏感菌株parC和gyrA基因的突變類(lèi)型均以Ser79Tyr和Ser81Leu突變?yōu)橹鳌?br>　　第二部分化膿性鏈球菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)抗生素耐藥性及耐藥機(jī)制的研究
　　目的:
　　研究環(huán)丙沙星不敏感化膿性鏈球

5、菌的耐藥性及其耐藥機(jī)制，并對(duì)這些菌株的同源性進(jìn)行分析，為院感控制提供依據(jù)。
　　方法:
　　用API20 Strep鏈球菌鑒定系統(tǒng)對(duì)2012年3月北京地區(qū)分離自猩紅熱患者的48株鏈球菌進(jìn)行鑒定，同時(shí)采用基質(zhì)輔助激光解析電離解析飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)進(jìn)行進(jìn)

6、一步鑒定。采用瓊脂稀釋法檢測(cè)環(huán)丙沙星及臨床常用7種抗生素的最低抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration，MIC)。對(duì)環(huán)丙沙星MIC≥4 mg/L的化膿性鏈球菌檢測(cè)氟喹諾酮染色體介導(dǎo)的耐藥基因gyrA，gyrB，parC，parE的突變，同時(shí)以環(huán)丙沙星MIC≤0.25 mg/L的化膿性鏈球菌做比對(duì)。采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳（Pulsed-Field Gel Electrophoresis，PFGE）對(duì)分離自北京

7、不同地區(qū)的菌株進(jìn)行同源性分析。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)API20 Strep鏈球菌鑒定系統(tǒng)和MALDI-TOF MS的鑒定，48株鏈球菌均為化膿性鏈球菌。其對(duì)左氧氟沙星、氨芐西林和青霉素的敏感率均為100％。對(duì)四環(huán)素、紅霉素和克林霉素的耐藥率分別為91.7％、91.7％和89.6％。環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星的MIC50分別為2mg/L、1 mg/L和≤0.25 mg/L; MIC90分別為4 mg/L、2 mg/L和0.5

8、 mg/L。48株化膿性鏈球菌中有12株對(duì)環(huán)丙沙星MIC為4mg/L，1株MIC為8 mg/L，菌株來(lái)自北京朝陽(yáng)區(qū)。對(duì)這13株喹諾酮類(lèi)耐藥基因檢測(cè)結(jié)果顯示，12株在parC基因上出現(xiàn)79位絲氨酸突變?yōu)楸奖彼峄蚶野彼幔⊿er79Phe/Tyr），10株在parC基因的121位出現(xiàn)丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸(Ala121Val)。發(fā)現(xiàn)1株在parC基因上Ser79Phe突變合并parE基因上371位絲氨酸突變?yōu)榱涟彼?Ser371Leu)的化膿性

9、鏈球菌，但該菌株對(duì)環(huán)丙沙星的MIC未顯著增高(MIC=4 mg/L)。17株試驗(yàn)菌株的PFGE結(jié)果顯示為7個(gè)克隆，其中克隆A均為環(huán)丙沙星MIC≥4 mg/L的菌株，主要分布在朝陽(yáng)區(qū)、大興區(qū)、豐臺(tái)區(qū)、順義區(qū)和石景山區(qū)，占MIC≥4 mg/L菌株的69.2％?？寺菌株也為環(huán)丙沙星MIC≥4 mg/L菌株，均分布在懷柔地區(qū)?？寺、D、E、F和G分別分散在不同地區(qū)。
　　結(jié)論:
　　parC基因突變是北京地區(qū)分離的化膿性鏈球菌對(duì)