p38MAPK信號(hào)通路在周期性張應(yīng)力介導(dǎo)的牙周膜成纖維細(xì)胞增殖中的作用.pdf

1、目的:
　　 牙周病是口腔中兩大主要疾病類型之一,也是人類最古老最普遍的疾病之一,在當(dāng)今世界范圍內(nèi)患病率依然很高,在我國(guó)牙周病的患病率及其危害遠(yuǎn)高于齲病。一般認(rèn)為,因牙周炎拔牙占拔牙總數(shù)的30%～44%。對(duì)于牙周病的病因?qū)W研究是個(gè)古老而復(fù)雜的領(lǐng)域,近一個(gè)多世紀(jì)以來(lái),世界各國(guó)的學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了大量而深入的研究,牙周炎發(fā)生的根本機(jī)制至今仍未完全明確。有研究證實(shí)咬合創(chuàng)傷參與了牙周炎的發(fā)生與發(fā)展,并且對(duì)牙周組織的改建產(chǎn)生了直接的影響。適當(dāng)

2、的咬合力可以使牙周膜中主要的感受性和效應(yīng)性細(xì)胞——牙周膜成纖維細(xì)胞發(fā)生增殖、分化和凋亡,從而參與牙周組織的改建過(guò)程。本次實(shí)驗(yàn)擬在成功構(gòu)建人牙周膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)—力學(xué)刺激模型的基礎(chǔ)上,通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑-8和RT-PCR等細(xì)胞檢測(cè)技術(shù),從分子和基因水平探討周期性張應(yīng)力對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖的影響,初步闡述p38MAPK信號(hào)通路在此影響過(guò)程中的作用,明確p38MAPK信號(hào)通路、周期性張應(yīng)力和成纖維細(xì)胞增殖三者之間的關(guān)系,為進(jìn)一步詮釋咬合

3、創(chuàng)傷在牙周炎發(fā)病過(guò)程中的作用提供新的思路,為探尋咬合創(chuàng)傷的干預(yù)治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象,構(gòu)建人牙周膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)—力學(xué)刺激模型,利用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng),以靜態(tài)組為對(duì)照,實(shí)驗(yàn)組分別加以1h,6h,12h,24h的張應(yīng)力刺激,頻率為0.1Hz,所加力值以加力板底部硅膠薄膜拉伸的形變率表示,形變率越大,則對(duì)細(xì)胞施加的張應(yīng)力越大,本次實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞形變率為1

4、0%。以細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑-8檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況,采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá);同時(shí)設(shè)計(jì)加力+p38MAPK特異性抑制劑組(0h,12h),加力前對(duì)細(xì)胞加以p38MAPK抑制劑SB203580,再對(duì)細(xì)胞施以張應(yīng)力后,再次檢測(cè)細(xì)胞增殖情況和PCNA的表達(dá)。通過(guò)SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.體外培養(yǎng)穩(wěn)定的人牙周膜成纖維細(xì)胞,成功地構(gòu)建了人牙周膜成纖維細(xì)胞體

5、外培養(yǎng)—力學(xué)刺激模型。
　　 2.在頻率為0.1Hz,形變率為1096的條件下,同對(duì)照組比較,加力1h時(shí)細(xì)胞增殖減少,6h時(shí)細(xì)胞增殖開(kāi)始上升,12h細(xì)胞增值達(dá)到高峰,24h細(xì)胞增殖受到抑制;加入抑制劑SB203580能夠抑制細(xì)胞增殖和PCNA的表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1.成功的構(gòu)建了人牙周膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)—力學(xué)刺激模型。
　　 2.在應(yīng)力加載條件下,在一定時(shí)間內(nèi)可促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖,加力時(shí)間過(guò)長(zhǎng)