卡托普利對(duì)同型半胱氨酸硫內(nèi)酯損傷血管內(nèi)皮的保護(hù)作用及機(jī)制探討.pdf

1、第一章同型半胱氨酸硫內(nèi)酯(HTL)對(duì)大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮功能的直接損傷作用及卡托普利保護(hù)作用的研究 目的：探討含巰基的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)卡托普利對(duì)HTL所致大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮功能損傷的保護(hù)作用。 方法：大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)與HTL(3～30mmol/L)孵育90min，檢測(cè)乙酰膽堿(Ach)引起的內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)和硝普鈉(SNP)引起的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)。同時(shí)檢測(cè)血管組織中丙二醛(MDA)和一氧化氮(

2、NO)含量。 結(jié)果： (1)HTL(3，10，30mmol/L)濃度依賴性地抑制了ACh引起的血管內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)(EDR)，對(duì)SNP引起的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)無(wú)明顯影響； (2)HTL在抑制大鼠胸主動(dòng)脈EDR的同時(shí)，增加血管組織MDA的含量、降低了NO水平； (3)卡托普利(0.003，0.01，0.03mmol/L)濃度依賴性地減輕了HTL對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈EDR的抑制作用，卡托普利(0.03mmol/

3、L)抑制了HTL所致的血管組織中MDA含量的升高，減輕HTL所致NO水平的降低；NO合酶抑制劑L-NAME和巰基抑制劑PHMB能分別取消和部分取消卡托普利對(duì)血管EDR的保護(hù)作用；而且卡托普利的這種保護(hù)效應(yīng)強(qiáng)于等濃度下的不含巰基的ACEI類依那普利拉以及Ang Ⅱ受體拮抗劑氯沙坦； (4)含有巰基的抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)、超氧化物歧化酶(SOD)、NADPH氧化酶的抑制劑Apocynin、L-精氨酸(L-Arg)也能顯

4、著減輕HTL對(duì)血管EDR反應(yīng)的損傷作用、增加NO的水平、減少血管組織中的MDA含量。 結(jié)論： (1)HTL在體外能直接損傷血管EDR反應(yīng)，其損傷機(jī)制可能與啟動(dòng)氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。 (2)含巰基和不含巰基的ACEI二者均能顯著減輕HTL所致的血管內(nèi)皮功能損傷，但前者大于后者；其保護(hù)作用的機(jī)制與提高NO水平和清除自由基有關(guān)，其中卡托普利所含的巰基可能起了重要作用。 第二章 HTL對(duì)在體大鼠血管內(nèi)皮功能的損傷作用

5、及卡托普利的保護(hù)作用及機(jī)制研究 目的：探討卡托普利對(duì)HTL所致在體大鼠血管內(nèi)皮功能損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。 方法：采用HTL灌胃8周的方法造成大鼠的高同型半胱氨酸血癥模型，同時(shí)用卡托普利(10，20，40mg/kg/day)干預(yù)。處死動(dòng)物，取胸主動(dòng)脈檢測(cè)內(nèi)皮依賴性及非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)，同時(shí)檢測(cè)血中PON1、ACE以及SOD活性，Ang Ⅱ、6-keto-PGF<,1α>、NO及MDA含量，免疫組化檢測(cè)血管組織內(nèi)皮細(xì)胞N

6、F-κB活性；RT-PCR法檢測(cè)肝組織中PON1mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果： (1)HTL顯著抑制ACh引起的大鼠胸主動(dòng)脈的EDR反應(yīng)，但對(duì)硝普鈉引起的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)無(wú)明顯影響，同時(shí)導(dǎo)致了大鼠血清NO水平、PGI<,2>的代謝產(chǎn)物6-keto-PGF<,1α>含量及SOD活性和PONl活性的降低，MDA濃度的增加、肝組織PON1mRNA表達(dá)下調(diào)、但對(duì)Ang Ⅱ含量無(wú)顯著性影響。HTL同時(shí)激活血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB活性

7、； (2)卡托普利在沒有顯著影響血清Ang Ⅱ含量的情況下，呈劑量依賴性地改善HTL損傷的大鼠胸主動(dòng)脈的EDR反應(yīng)，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB活性；同時(shí)降低血清中ACE活性與MDA的濃度、維持血清NO水平、SOD與PON1活性、增加6-keto-PGF<,1α>含量、促進(jìn)PON1mRNA的表達(dá)。 結(jié)論：卡托普利對(duì)HTL所致大鼠血管內(nèi)皮功能損傷具有保護(hù)作用。 第三章 HIL對(duì)體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用及卡托普

8、利的保護(hù)作用與機(jī)制探討 目的：用體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞探討卡托普利對(duì)HTL所致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，分別與不同濃度的HTL孵育，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞中TNF-α和sICAM-1的濃度，熒光顯微鏡檢測(cè)ROS的含量與NF-αB的激活，同時(shí)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞活力、LDH漏出量與NO水平，IκB-α蛋白表達(dá)。 結(jié)果： (1)HTL(1mmol/L)孵育內(nèi)

9、皮細(xì)胞3h后顯著增加細(xì)胞ROS含量，刺激了NF-κB的轉(zhuǎn)錄入胞核而活化，孵育細(xì)胞24h后明顯升高細(xì)胞上清液中sICAM-1和TNF-α濃度；降低細(xì)胞活力和NO的水平，增加LDH的漏出量。 (2)卡托普利 (0.03mmol/L)可顯著抑制HTL所致ROS含量的增加以及NF-κB的激活，這種作用可以被巰基抑制劑PHMB所阻斷，與NADPH氧化酶抑制劑Apocynin、NF-κB的抑制劑PDTC的效果相似；可抑制HTL刺激的培養(yǎng)液中