內(nèi)毒素血癥小鼠肺組織中miRNAs的表達(dá)變化及功能的初步研究.pdf

1、目的:
　　 檢測內(nèi)毒素血癥小鼠肺組織中miRNAs的表達(dá)情況，初步探討miRNAs在內(nèi)毒素血癥肺損傷中可能的作用。
　　 方法:
　　 1.經(jīng)腹腔注射大腸桿菌內(nèi)毒素(8mg/kg)制備小鼠急性肺損傷模型，采用高通量miRNA芯片技術(shù)初步篩選出內(nèi)毒素血癥肺組織中差異表達(dá)的miRNAs。
　　 2.應(yīng)用QRT-PCR技術(shù)檢測經(jīng)miRNA芯片初步篩選出的部分差異表達(dá)的miRNAs，以驗證其表達(dá)是否和芯片結(jié)果一

2、致。
　　 3.挑選出QRT-PCR驗證結(jié)果與芯片結(jié)果一致的miR-1949，研究不同時間及不同劑量LPS處理后RAW264.7細(xì)胞中miR-1949的表達(dá)情況。
　　 4.應(yīng)用miRNA靶基因預(yù)測軟件miRDB預(yù)測miR-1949的靶基因，從中選擇幾個靶基因，然后分別在組織及細(xì)胞水平檢測LPS處理后這些靶基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.經(jīng)miRNA芯片檢測發(fā)現(xiàn)，內(nèi)毒素血癥小鼠肺組織中共有17個

3、miRNAs表達(dá)上調(diào)，9個miRNAs表達(dá)下調(diào)。
　　 2.經(jīng)QRT-PCR驗證，miR-1949、miR-223、miR-150表達(dá)與芯片結(jié)果一致，其中miR-1949、miR-223表達(dá)上調(diào)，miR-150表達(dá)下調(diào)。
　　 3.LPS處理后RAW264.7細(xì)胞中miR-1949的表達(dá)呈現(xiàn)時間及劑量依賴效應(yīng)。
　　 4.對預(yù)測出的miR-1949的靶基因MAPK8、MAP2K1、SMEK1進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)LPS處