大鼠顱骨矢狀縫牽引成骨的體外研究.pdf

1、目的:探討建立幼年sD大鼠顱骨器官體外培養(yǎng)的方法，并研究外源性張力對顱骨矢狀縫成骨活動(dòng)的影響。 方法:取19日齡的SD大鼠顱頂骨矢狀縫組織塊，進(jìn)行器官培養(yǎng)。試驗(yàn)組加0.4克力，對照組不施力，并在倒置顯微鏡下觀察大體情況。培養(yǎng)0.5小時(shí)、3小時(shí)及6小時(shí)結(jié)束時(shí)，分別在解剖顯微鏡下取標(biāo)本的中間矢狀縫組織，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reve：rse transcriptase-PCR，RT-PCR)檢查胰島素樣生長因子-1(inSlJli

2、n-1ike growth factor-1，IGF-1)mRNA及I型膠原mRNA的變化情況。最后于培養(yǎng)24小時(shí)時(shí)收獲標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)觀察和免疫組織化學(xué)檢查，檢查指標(biāo)包括增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、IGF-1、IGF-1受體(IGF-1 receptor，IGF-1R)及I型膠原。 結(jié)果:在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，對照組骨縫未見明顯變化；試驗(yàn)組應(yīng)用彈力簧進(jìn)行縫牽

3、引后，骨縫逐漸加寬，未見斷裂。組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)對照組標(biāo)本骨縫保持正常發(fā)育，以成骨細(xì)胞為主；試驗(yàn)組標(biāo)本骨縫明顯增寬，縫內(nèi)成骨細(xì)胞活躍，毛細(xì)血管增生。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物經(jīng)PCR擴(kuò)增，得到IGF-1為398bp，I型膠原為111bD，內(nèi)參β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)為276bp，符合預(yù)計(jì)結(jié)果。0.5小時(shí)、3小時(shí)及6小時(shí)實(shí)驗(yàn)組IGF-1 mRNA表達(dá)量均高于對照組，而實(shí)驗(yàn)組I型膠原mRNA表達(dá)量與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。免疫組化結(jié)果顯示IGF-1、IGF-