葛根素抗百草枯誘導大鼠肺纖維化的實驗研究.pdf

1、百草枯（Paraquat，PQ），是目前世界范圍內(nèi)廣泛使用的除草劑。隨著其在我國農(nóng)業(yè)上的廣泛應用，PQ中毒也日趨增多。PQ可經(jīng)皮膚接觸、呼吸道及消化道進入體內(nèi)，造成急性中毒。PQ對人畜均有較強毒性，中毒致死劑量小。人口服致死量為30-40mg/kg。PQ中毒病程進展快且目前尚無特效解毒藥物，在臨床上病死率很高，有報道可高達80％以上。肺為PQ中毒的主要靶器官，也是百草枯中毒死亡的主要原因。大劑量中毒常由于急性肺損傷所致的呼吸衰竭及心、肝

2、、腎等多臟器功能衰竭而死亡；較小劑量的中毒往往引起遲發(fā)性的肺纖維化，病程相對較長，晚期多死于肺間質(zhì)纖維化所致的呼吸衰竭。傳統(tǒng)的糖皮質(zhì)激素和細胞毒藥物長期應用副作用大，療效不能令人滿意。故尋找行之有效的治療藥物是目前醫(yī)療界迫切需要解決的問題。 百草枯的中毒機制尚未完全闡明，但多數(shù)學者認為，其毒性機制在于氧化循環(huán)反應產(chǎn)生的毒性物質(zhì)所引起的氧化損傷，百草枯的毒性是多系統(tǒng)、多器官、多水平的。有研究表明，葛根素（Puerarin）具有廣泛

3、的藥理作用，如抗炎、抗氧化、抗缺血、抗肺纖維化等。 目的：觀察葛根素對PQ中毒大鼠血清丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）活性及肺組織勻漿羥脯氨酸（HYP）和轉化生長因子-β1（TGF-β1）含量的影響。探討葛根素對PQ中毒大鼠肺間質(zhì)纖維化的干預作用及其可能機制。 方法：健康Wistar大鼠144只，雌雄各半，隨機分為正常對照組（A組）、模型組（B組）、甲基強的松龍對照組（C組）（簡稱甲強龍組）、葛根素大（D組）、

4、中（E組）、?。‵組）劑量組，每組24只，各組動物按觀察時點3d、7d、14d、28d隨即分成4個亞組，每亞組6只。采用百草枯50mg/kg一次性灌胃染毒建立大鼠肺纖維化模型，A組大鼠給予等體積蒸餾水灌胃。染毒1h后，C組用甲基強的松龍40mg/kg．bw．d腹腔注射，連用3天。D、E、F組每天給予葛根素（100mg/kg．bw．d、50mg/kg．bw．d、30mg/kg．bw．d），觀察各組動物中毒反應。對到達觀察終點的動物稱重，麻

5、醉，腹主動脈采血3ml，放置離心機，取上清液，測血清MDA和SOD。開胸取出肺組織，稱重，計算肺系數(shù)，觀察肺組織大體病理變化，取右肺葉以4％多聚甲醛固定，HE染色、Masson染色，分別觀察肺組織病理改變。取左肺下葉，勻漿，檢測肺組織HYP和TGF-β1含量。 結果： 1．動物中毒反應比較：模型組動物中毒反應重，體重下降明顯；葛根素大、中、小劑量組動物中毒表現(xiàn)輕，體重下降較少，恢復較快。甲強龍組、葛根素不同劑量組各觀察點

6、體重與模型組比較，差異均有顯著性（P<0．05），葛根素劑量越大差異越明顯。 2．肺組織病理變化：（1）HE染色：模型組1-7d以急性肺泡炎為主要表現(xiàn)，3d時炎癥表現(xiàn)最重，14-28d成纖維細胞增生，大量肺泡結構萎陷、破壞，膠原沉積，肺纖維化初步形成。甲基強的松龍對照組和葛根素各劑量組各觀察點病理變化和百草枯組相似，但程度較輕。早期即肺泡炎期（3、7d），肺泡滲出、細泡侵潤等方面，甲基強的松龍組較葛根素各劑量組少，差異明顯（P<

7、0．05）；中后期即肺纖維化進展和纖維化期（14、28d），在膠原沉積，肺纖維化進展程度方面，葛根素各劑量組輕于甲基強的松龍對照組。（2）Masson染色：28d時模型組可見較多藍色膠原沉積于支氣管壁及肺泡間隔，藍染面積百分比較對照組有顯著性差異（P<0．01）。28d葛根素各劑量組藍染膠原沉積較少，藍染面積百分比較百草枯組差異有顯著性（P<0．05）。 3．血清MDA含量變化：模型組與對照組相比，各觀察點MDA含量明顯增高，差

8、異有顯著性（P<0．01）。葛根素各劑量組與模型組相比，各觀察點MDA含量明顯低于模型組，差異有顯著性（P<0．05）。 4．血清SOD含量變化：模型組與對照組相比，各觀察點SOD含量明顯降低，差異有顯著性（P<0．01）。葛根素各劑量組與模型組相比，各觀察點SOD含量明顯高于模型組，差異有顯著性（P<0．05）。 5．肺組織勻漿HYP含量變化：模型組與對照組相比，各觀察點HYP含量明顯增高，差異有顯著性（P<0．01）

9、。葛根素各劑量組與模型組相比，各觀察點HYP含量明顯低于模型組，差異有顯著性（P<0．05）。 6．肺組織勻漿TGF-β1含量變化：模型組 TGF-β1含量在染毒后顯著升高（P<0．05），14d時達峰值（P<0．01），28d仍高于正常（P<0．01）。葛根素各劑量組TGF-β1含量染毒3d時較對照組顯著增高（P<0．01），7、14、28d時明顯降低，與對照組無顯著性差異。與模型組相比，差異有顯著性（P<0．01）。

10、 結論： 1．PQ灌胃染毒后，可使大鼠血清MDA含量顯著升高，血清SOD活性明顯降低，腫組織勻漿HYP、TGF-β1含量明顯升高。 2．甲基強的松龍和葛根素各組大鼠中毒癥狀不同程度改善。病理觀察：早期即肺泡炎期（3、7d），甲基強的松龍組在減少肺泡滲出，減輕肺泡炎方面優(yōu)于葛根素各劑量組；中后期即肺纖維化進展和纖維化期（14、28d），在減少膠原沉積，減輕肺纖維化程度方面，葛根素大中劑量組效果明顯優(yōu)于甲基強的松龍組。