南瓜蛋白在抗人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系K562的作用研究.pdf

1、目的：測定南瓜蛋白(Cucurmosin，CUS)對體外培養(yǎng)的人慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞的增殖抑制作用；建立人慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞-NOD/SCID小鼠的血液模型和皮下移植瘤模型，并用于評價南瓜蛋白在小鼠體內(nèi)的抗慢粒活性；為南瓜蛋白潛在的抗慢性粒細(xì)胞白血病的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　 方法：采用MTT比色法，以天花粉蛋白(trichosanthin，TCS)為對照，測定CUS對體外培養(yǎng)的K562細(xì)胞的增殖

2、抑制作用。皮下注射K562細(xì)胞并多次接種傳代，建立K562細(xì)胞NOD/SCID小鼠的皮下移植瘤模型。采用X射線照射后尾靜脈注射K562細(xì)胞的方法，建立人慢性粒細(xì)胞白血病NOD/SCID小鼠的血液模型；通過外周血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞瑞氏染色、髓系抗原的流式細(xì)胞儀檢測、組織病理及RT-PCR檢測bcr/ab1融合基因等方法對血液模型進(jìn)行鑒定。分別使用皮下移植瘤模型和血液模型評價CUS在小鼠體內(nèi)的抗K562活性。
　　 結(jié)果：南瓜蛋白對體外

3、培養(yǎng)的K562細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，強(qiáng)于同類的天花粉蛋白，并且表現(xiàn)為時間和劑量依賴性；CUS處理24h、48h和72h的IC50分別為8.59 mg/L、3.85 mg/L和2.39mg/L。皮下注射K562細(xì)胞并多次接種傳代，建立K562細(xì)胞NOD/SCID小鼠的皮下移植瘤模型。靜脈注射5周后小鼠體重下降明顯，活動欠佳。部分動物可見瘤塊侵犯，例如眼眶、小腿，卵巢等；血常規(guī)白細(xì)胞計數(shù)與外周血鏡下所示基本一致，白細(xì)胞計數(shù)不與建模天數(shù)

4、成正比。照射后，外周血白細(xì)胞極低。所見以成熟粒系為主，且外周血象僅見一次幼稚細(xì)胞；外周血中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)染色積分甚低，以排除感染可能；骨髓細(xì)胞增生活躍，油鏡下觀察所示，幼稚細(xì)胞明顯；骨髓細(xì)胞髓系抗原(CD13、CD33和CD117)動態(tài)監(jiān)測結(jié)果顯示，空白組(照射未注射K562細(xì)胞)髓系抗原表達(dá)沒有明顯變化，而陰性組(照射且注射K562細(xì)胞)的髓系抗原表達(dá)漸進(jìn)升高，與建模天數(shù)呈正相關(guān)，陰性組小鼠瀕死狀態(tài)髓性抗原表達(dá)亦明顯升高

5、；肝脾組織流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測CD33表達(dá)，空白組和陰性組沒有差別，CD33百分比較低且無變化；雌性小鼠癌腫常侵犯卵巢，將癌腫侵犯臟器組織及肝、脾、肺、腎行病理檢查可示癌腫侵犯臟器呈典型腫痛組織形態(tài)，而肝、脾、肺、腎未見癌腫侵犯及明顯異常；RT-PCR檢測bcr/ab1融合基因，骨髓、癌腫侵犯臟器以及k562細(xì)胞可見bcr/ab1融合基因條帶，而肝、脾和外周血未見bcr/ab1融合基因條帶。小鼠體內(nèi)實驗結(jié)果顯示：CUS對K562細(xì)胞的皮下移植

6、瘤和血液模型均具有顯著抑制作用；給藥劑量為0.5mg/kg和1mg/kg的CUS對人慢粒皮下移植瘤的抑瘤率分別為53.45％和59.43％；而劑量為0.25mg/kg和0.5mg/kg的CUS給藥組小鼠的生存時間分別延長24.9％和36％。
　　 結(jié)論：⑴CUS對體外培養(yǎng)的K562細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，并表現(xiàn)為時間和劑量依賴性。⑵人慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞-NOD/SCID小鼠血液模型的鑒定方法應(yīng)以骨髓涂片、骨髓細(xì)胞髓