表皮生長因子受體反義重組腺病毒對乳腺癌細胞作用的實驗研究.pdf

1、中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院碩士學(xué)位論文表皮生長因子受體反義重組腺病毒對乳腺癌細胞作用的實驗研究姓名：李運軍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：馬林20050519軍醫(yī)進修學(xué)院煩士學(xué)位論文表皮生長因子受體反義重組腺病毒對乳腺癌細胞作用的實驗研究中文摘要目的：表皮生長因子受體( E G F R ) 是原癌基因H E R l ( c —e r b B l ) 的表達產(chǎn)物，在許多腫瘤細胞中超量表達、基因擴增和／或突變，并借助其介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)

2、使細胞生長失控和惡性轉(zhuǎn)化。在乳腺癌實驗?zāi)Ｐ蜕?，我們發(fā)現(xiàn)E G F R的表達隨著腫瘤發(fā)生能力的增強而提高，而且E G F R 反義R N A 表達載體可逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化表型。為了尋求治療乳腺癌的新手段，我們開發(fā)了E G F R 反義重組腺病毒，并通過觀察其對人乳腺癌M o A —M B 一2 3 l 細胞的體外增殖作用情況，以及對其放療敏感性的影- 向，初步探討其作為治療乳腺癌新手段的機制。實驗方法：人乳腺癌細胞系M D A - M B 一2 3

3、 1 常規(guī)培養(yǎng)，細胞計數(shù)繪制細胞生長曲線；人E G F R 的c D N A 片段被反向亞克隆入E l ／E 3 缺失的5 型腺病毒載體中而得到A d E 5 ，E G F R 反義R N A 的表這由C M V 啟動子控制；進而用細胞培養(yǎng)和流式細胞儀( F C M ) 技術(shù)研究其對人乳腺癌細胞株M D A - M B 一2 3 l 凋亡及細胞周期分布的影響，比較聯(lián)合v 一射線對M D A - b I B - 2 3 1 克隆形成率及細

4、胞周期分布的作用。實驗結(jié)果表明：( 1 ) M D A - M B 一2 3 1 細胞被A d E 5 感染后，E G F R 蛋白質(zhì)的表達被強烈地抑制，但并不導(dǎo)致細胞凋亡；( 2 ) A d E 5 感染后以Y 一射線照射細胞，克隆形成率被抑制。且這種作用與病毒量和照射劑量相關(guān)聯(lián)；( 3 ) 進而流式細胞儀分析顯示，3 0 0 p f u ／細胞的A d E 5 轉(zhuǎn)染可使M D A - M B - 2 3 1 細胞擺脫對放射線抗拒的G