RNA干擾抑制腫瘤細胞血管內皮生長因子的表達.pdf

1、北京中醫(yī)藥大學碩士學位論文RNA干擾抑制腫瘤細胞血管內皮生長因子的表達姓名：呂青申請學位級別：碩士專業(yè)：中西醫(yī)結合基礎指導教師：王繼峰20050501RNA干擾技術抑制腫瘤細胞血管內皮生長因子的表達了一定的療效。最典型的藥物就是上世紀六十年代在日本造成胎兒畸形而被停用的“反應?！??！胺磻！笨赡軐е绿旱陌l(fā)育畸形，四肢發(fā)育不完全，產(chǎn)生“海豹足”，這種畸形的產(chǎn)生就是因為該藥物抑制了胚胎發(fā)育階段的微血管生成作用而產(chǎn)生的。但是這些方法的作用靶

2、點通常都是在微血管生成作用中的一些蛋白分子，如血管內皮生長因子，血管內皮生長因子受體等。這并不能從較根本的水平抑制微血管生成的作用。基因水平的治療因此被列入了研究范圍之中。但是腫瘤導致的基因突變通常是多靶點的。首先，人們很難確定到底有多少基因突變在腫瘤發(fā)生過程中起了作用，其次，全部抑制或修復所有的基因突變在目前的科學水平還是不可行的。所幸的是，1998年，F(xiàn)ire和他的同事們在一次很偶然的實驗中發(fā)現(xiàn)了RNA干擾現(xiàn)象。其實，在更早的時候，

3、RNA干擾的現(xiàn)象已經(jīng)在植物中作為一種植物自身抗病毒的機制而被發(fā)現(xiàn)，但是未引起重視。經(jīng)過Tuschl，Barrel等人的卓著努力，RNA干擾的機制逐一被揭開?，F(xiàn)在RNA干擾已經(jīng)逐漸成為一種常規(guī)的基因“敲除”的手段。RNA干擾在腫瘤治療方面的研究也取得了重大的進展。已經(jīng)有許多文章報道了用RNA干擾的方法抑制血管內皮生長因子的表達，我們實驗小組也在致力于這方面的研究，并且取得一定的成果。體外實驗表明RNA干擾能夠抑制90％以上的VEGF表達，

4、以及接近100％的蛋白水平表達。這顯然是一個很有前途的治療方式。但是目前仍有幾個難題擺在面前：第一，siRNA的穩(wěn)定性；第二，siRNA表達系統(tǒng)的安全性；第三，體內轉染系統(tǒng)的效率已經(jīng)安全性；第四，給藥方法。RNA是一種較不穩(wěn)定的分子，雖然化學修飾的方法在一定程度上提高了siRNA的穩(wěn)定性，但是在體內存在眾多酶的環(huán)境下，siRNA的作用時間仍然不夠理想。于是有人采用構建siRNA表達系統(tǒng)通過腺病毒，反轉錄病毒或是慢病毒導入動物細胞內，這雖

5、然解決了siRNA穩(wěn)定性的問題，但是表達系統(tǒng)的安全性尚未在體內實驗中得到報道。如果采用siRNA直接導入體內的方法，轉染試劑則成為一個比較大的問題，許多體外轉染試劑已經(jīng)被廣泛應用，但是體內轉染試劑的效率和作用，尚未得到一致認可。我們研究小組在siRNA的體內實驗中發(fā)現(xiàn)，siRNA確能很大程度上抑制腫瘤的生長。最后給藥方式是最大的一個難題，對于表皮的腫瘤我們可以采取瘤內注射的方法，但是對于機體深部的腫瘤卻沒有一種很好的傳遞機制。靜脈給藥是