人乳腺癌細胞BRCA1對hTERT基因表達的調控研究.pdf

1、乳腺癌(breastcancer)是婦女最常見的惡性腫瘤之一。近20年來其發(fā)病率呈明顯上升趨勢，嚴重危害婦女的身心健康。既往研究表明端粒酶激活與乳腺癌的早期生成密切相關。作為人端粒酶最核心成分人端粒酶催化亞單位hTERT(humantelomerasereversetranscriptase)是調節(jié)端粒酶活性的限速步驟，因此研究hTERT轉錄調控有助于揭示乳腺癌部分發(fā)生機制。乳腺癌易感基因BRCA1是近來發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因。大量研究證明

2、，BRCA1基因結構、功能異常不僅與遺傳性乳腺癌的發(fā)生密切相關，與部分散發(fā)性乳腺癌的發(fā)生關系也很密切。近來有許多學者在研究腫瘤細胞hTERT上游E-box位點突變時推測BRCA1與hTERT轉錄調控相關。但在乳腺癌中BRCA1基因是否參與hTERT轉錄調控及其相關機制目前仍不明確。 本研究分析人乳腺癌和癌旁組織中hTERTmRNA和BRCA1蛋白表達及二者之間的表達關系，觀察外源性BRCA1基因轉染MCF-7細胞強制表達后對hT

3、ERT蛋白表達的影響，以了解人乳腺癌組織中BRCA1蛋白對hTERTmRNA轉錄調控及對hTERT蛋白表達的影響，為進一步深入研究BRCA1對hTERT的調控機制奠定基礎。 采用RT-PCR和免疫組化分別檢測43例乳腺癌患者和40例乳腺癌癌旁組織中的hTERTmRNA和BRCA1蛋白的表達；在體外實驗中應用脂質體將BRCA1真核表達質粒轉染至乳腺癌MCF-7細胞中強制表達，WesternBlot檢測轉染細胞中hTERT蛋白表達的

4、變化。噻唑藍比色試驗(MTT)觀察BRCA1真核表達質粒轉染MCF-7細胞后細胞增殖活性的變化。 結果表明：41例乳腺癌組織中，30例檢測出hTERTmRNA陽性，陽性率75.0％；而40例癌旁組織中只有2例檢測出hTERTmRNA表達陽性，陽性率5.0％，在乳腺癌和癌旁組織中hTERTmRNA表達具有顯著差異(卡方檢驗p＜0.05)。在41例乳腺癌標本中，檢測出BRCA1蛋白陽性15例，陽性率34.8％；而在40例癌旁組織中3

5、1例檢測出BRCA1蛋白陽性，陽性率77.5％。BRCA1蛋白的表達在兩組間也有顯著的差異(卡方檢驗p＜0.05)。并且在乳腺癌組織中hTERTmRNA的高表達和BRCA1蛋白的低表達有著明顯的相關性(p＜0.05)。體外實驗中，將pcDNA3.1-BRCA1真核表達質粒轉染MCF-7乳腺癌細胞株后，WesternBlot結果發(fā)現(xiàn)BRCA1蛋白表達明顯增加，同-4-時hTERT蛋白表達受到明顯抑制。噻唑藍(MTT)比色法觀察轉染后的MC