TGF-β1對(duì)胰腺癌細(xì)胞EMT及侵襲性的影響.pdf

1、背景:胰腺癌是消化系統(tǒng)惡性程度高、預(yù)后差的惡性腫瘤之一，總體五年生存率1％。中國(guó)上海的胰腺癌發(fā)病率為10/10萬,已接近歐美等高發(fā)地區(qū)。胰腺癌屬于高度惡性腫瘤，侵襲性強(qiáng)，早期常常已經(jīng)侵潤(rùn)大血管，神經(jīng)等，造成手術(shù)切除難度大,嚴(yán)重降低生存率。近年來,發(fā)現(xiàn)TGF-β通路在腫瘤晚期發(fā)生異常,癌細(xì)胞在其作用下顯現(xiàn)出一些間質(zhì)細(xì)胞的特性,變得更富侵襲性,多數(shù)學(xué)者將這一現(xiàn)象稱位上皮細(xì)胞間質(zhì)變（EMT）,但其中的一些機(jī)制仍然未得到闡明。本實(shí)驗(yàn)從形態(tài)學(xué)，侵

2、襲性以及相關(guān)基因表達(dá)變化方面研究了胰腺癌細(xì)胞BxPc-3在TGF-β1長(zhǎng)時(shí)間作用后發(fā)生EMT（上皮間質(zhì)化轉(zhuǎn)變）的情況，以及對(duì)侵襲性的影響，同時(shí)探索其在細(xì)胞黏附方面的機(jī)制。 目的:使用TGF-β1引發(fā)胰腺癌細(xì)胞（BxPc－3）上皮間質(zhì)變(EMT)，影響其侵襲性，探索其分子學(xué)機(jī)制。證實(shí)胰腺癌細(xì)胞具有EMT的傾向，為進(jìn)一步的干預(yù)性試驗(yàn)做好理論基礎(chǔ)。 方法:培養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞BxPc-3。用TGF－β1進(jìn)行誘導(dǎo)。試驗(yàn)分為濃度相關(guān)性和

3、時(shí)間相關(guān)性兩組：濃度相關(guān)組為分別以不同劑量的TGF－β1（5，10，20,50ng/ml）作用細(xì)胞24小時(shí)；時(shí)間相關(guān)組為以10ng/ml TGF－β1作用細(xì)胞,分別持續(xù)0,4,7,14天。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變；使用transwell-matrigel體外侵襲試驗(yàn)分別測(cè)定不同劑量，不同持續(xù)時(shí)間對(duì)胰腺癌細(xì)胞BxPc-3侵襲性的影響。用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法（RT－PCR）試驗(yàn)測(cè)試兩種鈣粘連蛋白（E－cad，N－cad）的表達(dá)變化

4、。 結(jié)果:TGF-β1對(duì)BxPc-3形態(tài)學(xué)的影響：BxPc-3細(xì)胞在TGF-β1刺激下逐漸由原來的圓形片團(tuán)狀生長(zhǎng)變化為長(zhǎng)梭形，并且逐漸分散。Transwell-matrigel體外侵襲試驗(yàn):劑量相關(guān)性試驗(yàn)組，在不同劑量TGF-β1刺激下，侵襲細(xì)胞平均數(shù)分別為74.8±5.675(0ng/ml), 76.8±6.181(5ng/ml), 78.0±4.301(10ng/ml), 73.6±4.450(20ng/ml),77.6±

5、4.930(50ng/ml) P>0.05,各劑量之間差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；時(shí)間相關(guān)性試驗(yàn)，各持續(xù)時(shí)間下侵襲細(xì)胞平均數(shù)分別為：77.4±4.037（0天），104.2±4.494（4天）,139.6±4.775（7天）,205.5±8.456(14天),P<0.01,有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法（RT－PCR）試驗(yàn)檢測(cè)癌細(xì)胞中兩種鈣粘連蛋白（E－cad，N－cad）的表達(dá)變化：在濃度相關(guān)性試驗(yàn)組中，E－cad的相對(duì)表達(dá)分別

6、為35.40(0ng/ml), 37.43(5ng/ml), 36.55(10ng/ml), 34.24(20ng/ml), 36.47(50ng/ml), P>0.05，未見顯著變化；在時(shí)間相關(guān)試驗(yàn)中，E－cad表達(dá)隨刺激時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降，分別為38.57(0天),38.42(4天),21.36(7天),9.82(10天),3.28(14天),P<0.01從第4-7天開始有顯著差異,到14天時(shí)幾乎表達(dá)極少；N－cad在兩試驗(yàn)組中都未見