活血化瘀方劑對博萊霉素所致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用.pdf

1、研究背景及目的:
　　特發(fā)性肺纖維化是一種不明原因引起的慢性、不可逆的間質(zhì)性肺疾病，病理學(xué)表現(xiàn)為尋常型間質(zhì)性肺炎，目前尚無有效的治療手段。因此尋找可行的治療方法迫在眉睫。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)將肺纖維化歸為“肺痹”、“肺脹”等范疇，對癥予活血化瘀法治療，取得了一定的療效。故課題希望通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)活血化瘀法干預(yù)纖維化的有效性，評估中西醫(yī)結(jié)合治療可否進(jìn)一步改善纖維化治療效果，并初步探討活血化淤方劑防治纖維化可能的作用機(jī)制。
　　方法:

2、>　　50大鼠隨機(jī)分為5組:①正常對照組（CTRL組）;②博萊霉素模型組（BLM組）;③中藥復(fù)方組（CH組）;④吡非尼酮組（PF組）;⑤中藥復(fù)方-吡非尼酮聯(lián)合組(CP組)。正常對照組氣管內(nèi)滴注生理鹽水對照，其余各組復(fù)制博萊霉素致大鼠纖維化模型。①②組生理鹽水灌胃對照，③④⑤組分別予活血化淤方劑12g/kg/天，吡非尼酮50mg/kg/天，以及兩者聯(lián)合灌胃，分早晚2次灌入。28天時(shí)處死大鼠，留取標(biāo)本。通過組織病理學(xué)的方法評估纖維化程度:測

3、量肺系數(shù)，HE切片染色評分，MASSON切片染色光密度分析。應(yīng)用分子生物學(xué)的方法檢測可能的作用通路和靶點(diǎn):Westernblot法檢測肺組織ALK5、Smad2/3、EGFR的表達(dá)，TBA法檢測MDA的含量。
　　結(jié)果:
　　纖維化程度的判斷:
　　造模后第28天各組大鼠的肺系數(shù)┏━━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━━┓┃┃肺系數(shù)┃與CTRL組比較┃與BLM組比較┃各組間

4、比較┃┃┣━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━┫┃組別┃┃┃┃┃┃┃i±s┃P┃P┃FP┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━┫┃CTRL組┃O.4244-O.023┃-┃0.003┃┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━┫┃BLM組┃O.749±0.141┃0.003┃-┃┃┣━━━━━╋━━━

5、━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━┫┃CH組┃0.824±0.094┃0.001┃0.759┃5.2260.003┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━┫┃PF組┃O.757-0.080┃0.002┃＞0.999┃┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━┫┃CP組┃O.753+0.174┃0.002┃＞

6、0.999┃┃┗━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━━━┛
　　造模后第28天各組大鼠的肺HE染色評分┏━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┓┃┃HE染色評分┃對比CTRL組┃對比BLM組┃對比CP組┃各組間比較┃┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━┫┃組別┃┃┃┃┃┃┃┃M(Q1,Q3)┃P

7、┃P┃P┃P┃┣━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━┫┃CTRL組┃O.00(0.00,O.25)┃-┃＜0.001┃0.007┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━┫┃BLM組┃4.00(3.00,6.25)┃＜0.001┃-┃＜0.001┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━┫

8、┃CH組┃3.00(1.75,4.00)┃＜0.001┃0.039┃0.035┃＜0.001┃┣━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━┫┃PF組┃2.50(1.75,4.00)┃＜0.001┃0.032┃0.043┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━┫┃CP組┃I.50(0.75,3.00)┃0.007┃＜0.001┃-┃┃┗━━━━

9、┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┛
　　造模后第28天各組大鼠的肺Masson染色積分光密度┏━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━┓┃┃積分光密度┃對比CTRL組┃對比BLM組┃對比CP組┃各組間比較┃┃┣━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃組別┃┃┃┃┃┃┃┃(x)±S┃P┃P┃P┃P┃┣━

10、━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CTRL組┃O.007±0.000┃-┃＜0.001┃＜0.001┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃BLM組┃O.153±0.150┃＜0.001┃-┃＜0.001┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CH組┃O.106±0.016

11、┃＜0.001┃＜0.001┃＜0.001┃＜0.001┃┣━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃PF組┃O.074±0.007┃＜0.001┃＜0.001┃(0.001┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CP組┃O.050±0.013┃＜0.001┃＜0.001┃-┃┃┗━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━

12、━┻━━━━━━┻━━━━━━━┛
　　可能的作用靶點(diǎn):
　　造模后第28天各組大鼠肺MDA的含量┏━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━┓┃┃吸光度┃對比CTRL組┃對比BLM組┃對比CP組┃各組間比較┃┃┣━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃組別┃┃┃┃┃┃┃┃(x)±S┃P┃P┃P┃P┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━

13、━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CTRL組┃O.597±O.067┃-┃＜0.001┃0.584┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃BLM組┃1.4934±0.190┃＜0.001┃-┃＜0.001┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CH組┃O.914±0.119┃0.023┃0.001┃0

14、.060┃＜0.001┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃PF組┃1.001±0.158┃0.006┃0.002┃0.017┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CP組┃O.663±0.158┃0.584┃＜0.001┃-┃┃┗━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━┛<

15、br>　　造模后第28天各組大鼠肺ALK5的相對表達(dá)量┏━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━┓┃┃內(nèi)參校正光密度┃對比CTRL組┃對比BLM組┃對比CP組┃各組間比較┃┃┣━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃組別┃┃┃┃┃┃┃┃(x)±s┃P┃P┃P┃P┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━

16、━━┫┃CTRL組┃1.00±0.00┃-┃＜0.001┃0.135┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃BLM組┃3.39±0.30┃＜0.001┃-┃＜0.001┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CH組┃2.16±0.15┃＜0.001┃＜0.001┃＜0.001┃＜0.001┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋

17、━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃PF組┃2.21±0.10┃0.135┃＜0.001┃＜0.001┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CP組┃1.25±0.24┃＜0.001┃＜0.001┃-┃┃┗━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━┛
　　造模后第28天各組大鼠肺Smad2/3的相對表達(dá)

18、量┏━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━┓┃┃內(nèi)參校正光密度┃對比CTRL組┃對比BLM組┃對比CP組┃各組間比較┃┃┣━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃組別┃┃┃┃┃┃┃┃(x)±s┃P┃P┃P┃P┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CTRL組┃1.00±0.00┃-┃＜0.0

19、01┃0.971┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃BLM組┃2.87±0.40┃＜0.001┃-┃＜0.001┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CH組┃1.51±0.41┃0.088┃0.001┃0.083┃＜0.001┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━

20、┫┃PF組┃1.33±0.47┃0.258┃＜0.001┃0.245┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CP組┃0.99±0.08┃0.971┃＜0.001┃-┃┃┗━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━┛
　　造模后第28天各組大鼠肺EGFR的相對表達(dá)量┏━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━┳━━

21、━━━━┳━━━━━━━┓┃┃內(nèi)參校正光密度┃對比CTRL組┃對比BLM組┃對比CP組┃各組間比較┃┃┣━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃組別┃┃┃┃┃┃┃┃(x)±s┃P┃P┃P┃P┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CTRL組┃1.00±0.00┃-┃＜0.001┃0.989┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋

22、━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃BLM組┃2.67±0.40┃＜0.001┃-┃＜0.001┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CH組┃1.43±0.41┃0.089┃＜0.001┃0.087┃＜0.001┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃PF組┃1.22±0.16┃0.365┃＜0.001┃O．35

23、8┃┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━┫┃CP組┃1.00±0.21┃0.989┃＜0.001┃-┃┃┗━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━┛
　　結(jié)論:
　　活血化淤方劑可改善大鼠的肺纖維化，同時(shí)與吡非尼酮聯(lián)合應(yīng)用可以提高治療效果。活血化淤方劑作用機(jī)制可能是通過降低ALK5、Smand2/3、EGFR的表達(dá)，減輕肺