稠李屬三種果實花色苷抗氧化活性研究.pdf

1、山桃稠李(Padus maackii)、稠李(Padus racemosa)、紫葉稠李(Padus virginiana)為薔薇科稠李屬的三種植物，在我國南北部地區(qū)均有分布生長，是多年生的落葉喬木。我國學(xué)者在稠李屬植物的種植技術(shù)等方面研究頗多，而對其果實的花色苷研究利用的報道卻很少。
　　本試驗采用稠李屬的三種果實花色苷為研究對象，進(jìn)行抗氧化能力對比，并且與Vc相比較;研究了三種果實的花色苷對人HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用，以及對

2、HepG2細(xì)胞的抗氧化系統(tǒng)影響;并探討花色苷對HepG2細(xì)胞Nrf2/Keap1信號通路的作用。試驗結(jié)論如下:
　　(1)對稠李屬植物果實花色苷體外抗氧化能力進(jìn)行測定，稠李屬植物果實花色苷對·OH、O2-·、H2O2、ABTS、DPPH均有較強(qiáng)的清除能力以及還原能力，且隨花色苷濃度增高抗氧化能力均增強(qiáng)，并呈劑量關(guān)系，但不及Vc對照組的清除能力。
　　(2)胎盤藍(lán)染色法測細(xì)胞的生長變化曲線，MTT法檢測細(xì)胞的生長抑制率，結(jié)果發(fā)

3、現(xiàn)花色苷作用HepG2細(xì)胞后，各處理組細(xì)胞增殖受到抑制，活細(xì)胞數(shù)量隨花色苷質(zhì)量濃度的增大及作用時間的增加而呈下降的趨勢，具有濃度及時間的依賴性關(guān)系。在倒置顯微鏡下，觀察花色苷作用細(xì)胞后的形態(tài)，發(fā)現(xiàn)隨著三種果實花色苷質(zhì)量濃度的增大，細(xì)胞的特征形態(tài)逐漸消失并簇集成團(tuán)。說明三種果實花色苷具有抑制肝癌細(xì)胞的生長的作用。
　　(3)采用試劑盒法測定了三種果實花色苷作用于HepG2細(xì)胞48h后，細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶/物(T-SOD、GSH-ST、G

4、SH-Px、CAT、GSH)、氧化酶(XOD)及T-NOS、iNOS、cNOS活性和MDA含量的變化情況。通過檢測發(fā)現(xiàn)，三種果實花色苷對HepG2細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶以及GSH含量影響的大小關(guān)系為稠李＜山桃稠李＜紫葉稠李，三種果實花色苷對HepG2細(xì)胞氧化酶活性以及MDA含量影響的大小關(guān)系為稠李＞山桃稠李＞紫葉稠李。這與MTT法測定的腫瘤細(xì)胞抑制率結(jié)果一致，證實了由于抗氧化酶活力減弱，氧化酶的活力升高以及丙二醛含量的增加導(dǎo)致細(xì)胞的損傷。

5、>　　(4)采用熒光探針DCFH-DA法檢測三種果實花色苷作用HepG2細(xì)胞12、24、48h后，ROS的水平變化情況。結(jié)果表明，隨花色苷質(zhì)量濃度的增大以及作用時間的延長，ROS的生成在逐漸增加，處理組細(xì)胞內(nèi)活性氧水平與對照組比較，均明顯升高，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05）。說明由于花色苷作用HepG2細(xì)胞后ROS含量升高，迫使細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)內(nèi)，抗氧化酶的活性下降，氧化酶活性上升，MDA生成增多以及GSH減少，引發(fā)抗氧化系統(tǒng)

6、失調(diào)，以致細(xì)胞凋亡。
　　(5)采用酶聯(lián)免疫法檢測PI3K激酶的活性變化。結(jié)果顯示，隨著三種果實花色苷質(zhì)量濃度的升高PI3K激酶的活性在逐漸降低，且與對照組比差異均極顯著(p＜0.01)。采用實時熒光定量RT-PCR法檢測GSTP1、Nrf2、Keap1的基因表達(dá)，結(jié)果顯示，三種果實花色苷作用于HepG2細(xì)胞48h后，GSTP1、Nrf2、Keap1的基因表達(dá)均隨花色苷質(zhì)量濃度的增大而下調(diào)，且與對照組比差異均極顯著(p＜0.01)