Genistein對人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響.pdf

1、流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)由于飲食習(xí)慣的關(guān)系，不同民族中各種腫瘤的發(fā)病率顯著不同[1]。在各種飲食因素中，大豆異黃酮由于它的體內(nèi)體外抑癌作用得到了很大的關(guān)注[2]。Genistein是大豆中主要的異黃酮成份，已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長，其機(jī)制可能與周期阻滯、誘導(dǎo)凋亡以及調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等多種途徑有關(guān)[3]。但其具體機(jī)制尚未完全清楚。 本研究擬使用雌激素受體陰性人乳腺第2頁，共92頁癌細(xì)胞株MDA-MB-231作為體外模型，初步探

2、討ERK5和ERK1/2MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在genistein對MDA-MB-231細(xì)胞增殖中的作用，為進(jìn)一步了解genistein對腫瘤細(xì)胞作用的分子機(jī)制提供新的思路。 目的：研究ERK5及ERK1/2MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與genistein對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖抑制作用的關(guān)系，進(jìn)一步探討genistein抑制MDA-MB-231細(xì)胞增殖的相關(guān)作用機(jī)理。方法：采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測不同濃度genist

3、ein以及聯(lián)合應(yīng)用MEK1/2抑制劑(PD98059)對MDA-MB-231細(xì)胞增殖的抑制作用；采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況；應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測不同濃度genistein及聯(lián)合應(yīng)用MEK1/2抑制劑(PD98059)作用48小時后的細(xì)胞周期情況；應(yīng)用WesternBlot分別檢測不同濃度genistein及聯(lián)合應(yīng)用MEK1/2抑制劑(PD98059)作用48小時后的MEK5、ERK5，凋亡相關(guān)蛋白NF-КB、Bax、Caspase3

4、以及Raf、ERK1、ERK2、c-Jun、c-Fos蛋白表達(dá)。結(jié)果：MTT比色法檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，genistein作用48小時后，細(xì)胞存活度隨濃度增加而降低，呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，合用MEK1/2抑制劑(PD98059)可以增強(qiáng)genistein的抑癌作用；流式細(xì)胞儀檢測到細(xì)胞產(chǎn)生凋亡，且隨genistein濃度增加，凋亡率增加；流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，不同濃度genistein作用MDA-MB-231細(xì)胞48小時后，細(xì)胞周

5、期發(fā)生了G2-M期阻滯，并且呈明顯劑量-效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)合用MEK1/2抑制劑(PD98059)后，細(xì)胞周期阻滯發(fā)生逆轉(zhuǎn)，并且隨著MEK1/2抑制劑(PD98059)濃度的增加，細(xì)胞周期阻滯逆轉(zhuǎn)的程度增加；WesternBlot分析提示隨著第3頁，共92頁genistein劑量的增加，MEK5、ERK5蛋白表達(dá)下調(diào)，NF-КB蛋白表達(dá)下調(diào)、Bax、Caspase3蛋白表達(dá)上調(diào)，Raf、ERK1、ERK2、c-Jun、c-Fos蛋白表達(dá)上調(diào)。