參附對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腸上皮細(xì)胞線粒體功能的影響.pdf

1、目的：通過觀察內(nèi)毒素血癥大鼠外周血TNF-α、IL-10濃度變化，腸道線粒體膜電位的變化及線粒體Cyt c釋放水平，并結(jié)合小腸組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)，探討參附注射液(ShenFu injection，SF)對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腸上皮細(xì)胞線粒體功能的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　方法：選擇健康成年雄性SD大鼠96只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Con組)、陽性對(duì)照組即脂多糖+生理鹽水組(Mod組)、治療組即脂多糖+參附組(SF組)，各組又分為1h、3h、

2、6h和12h四個(gè)時(shí)間亞組，每組8只。水合氯醛腹腔麻醉后，分離左側(cè)股動(dòng)脈，進(jìn)行動(dòng)脈插管，插管后立即注入0.3ml肝素生理鹽水(含肝素300IU)，以BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)連續(xù)描記心率(HR)、血壓(BP)，待血壓穩(wěn)定后，Mod組和SF組采用尾靜脈注射脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS5mg/kg)復(fù)制內(nèi)毒素血癥模型，接著Mod組緩慢靜脈注射NS20ml/kg，SF組緩慢靜脈注射SF20ml/kg[4]，Con組經(jīng)尾

3、靜脈緩慢推注NS5mg/kg；各時(shí)間亞組分別于注射LPS后1h、3h、6h和12h等時(shí)間點(diǎn)采集血液和小腸組織標(biāo)本。采用酶聯(lián)免疫吸附法測腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素10(IL-10)濃度；采用流式細(xì)胞儀測線粒體膜電位，免疫印跡法檢測胞漿Cyt c水平；小腸組織切片行HE染色，在光鏡下觀察小腸組織病理形態(tài)學(xué)，并制成電鏡標(biāo)本行醋酸鈾-檸檬酸鉛雙染色，在電鏡下觀察小腸線粒體超微結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：1.HR、平均動(dòng)脈壓(MAP)

4、的變化Mod組HR較Con組在1h、3h時(shí)升高，在6、12h時(shí)下降，各時(shí)間點(diǎn)差異顯著(p<0.05或p<0.01)；SF組HR同Con組比較，在各時(shí)間點(diǎn)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；SF組HR同Mod組比較相對(duì)穩(wěn)定，各時(shí)間點(diǎn)差異顯著(p<0.01)；Mod組MAP同Con組比較在1h時(shí)變化不明顯，無顯著差異(p>0.05)，在3h、6h、12h均下降，差異顯著(p<0.01)，SF組MAP在各時(shí)間點(diǎn)同Con組比較均無明顯變化

5、，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　2.病理組織學(xué)改變Con組小腸黏膜各層結(jié)構(gòu)完整，形態(tài)正常，絨毛排列整齊；Mod組腸壁變薄，黏膜明顯萎縮，絨毛短縮，上皮壞死脫落，大量中性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞細(xì)胞浸潤；與Mod組相比，SF組小腸黏膜病理改變明顯減輕，僅見黏膜水腫和少量中性粒細(xì)胞細(xì)胞浸潤。
　　3.電鏡顯示Con組小腸黏膜上皮細(xì)胞及細(xì)胞器結(jié)構(gòu)完整，形態(tài)正常；Mod組小腸黏膜上皮細(xì)胞在出現(xiàn)腫脹，細(xì)胞間緊密連接增寬或開放，吸

6、收細(xì)胞表面微絨毛變短、稀疏，部分倒伏或脫落，線粒體腫脹，嵴不清，空泡，并可見大量溶酶體酶；SF組小腸黏膜上皮細(xì)胞表面輕微微絨毛脫失、倒伏，較Con組稍變短，線粒體僅輕度水腫，偶見空泡狀，未見溶酶體酶。
　　4.TNF-α、IL-10濃度與Con組比較，Mod組、SF組TNF-α水平在各時(shí)間點(diǎn)明顯增加(p<0.05)，Mod組、SF組TNF-α水平均在3h達(dá)高峰；與Con組比較，Mod組IL-10的濃度在注射LPS后1h升高，3h即

7、顯著升高，在6h達(dá)高峰，12h較6h下降，在各時(shí)間點(diǎn)均較Con組升高，差異顯著(p<0.01)，SF組IL-10的濃度在各時(shí)間點(diǎn)與Con組比較均明顯升高，差異顯著(p<0.01)。SF組與Mod組各時(shí)間點(diǎn)比較均降低，差異顯著(p<0.05)。
　　5.線粒體膜電位的變化大鼠在注射LPS后，線粒體膜電位Mod組同Con組相比，1、3、6、12h明顯降低(p<0.05或p<0.01)；而SF組同Con組相比1h無明顯變化(p>0.05

8、)，3、6、12h明顯降低(p<0.01)，Mod組同SF組比較在1、3、6、12h線粒體膜電位減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。
　　6.胞漿Cyt c的水平大鼠在注射LPS后，線粒體釋放Cyt c到胞漿，Mod組同Con組相比，1、3、6、12hCyt c釋放明顯增多(p<0.01)；而SF組同Con組相比1h無明顯增加(p>0.05)，3、6、12hCyt c釋放明顯增多(p<0.01)，SF組同Mod組比較在1、3、