神經(jīng)干細(xì)胞及神經(jīng)元對脊髓損傷的作用.pdf

1、第一部分神經(jīng)干細(xì)胞及原代神經(jīng)元的分離培養(yǎng)實驗一Wistar大鼠腦的神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定目的:1、探討Wistar大鼠的神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定方法.2、為脊髓橫斷模型的細(xì)胞移植提供足夠的神經(jīng)干細(xì)胞.結(jié)果:接種后,許多單個圓形細(xì)胞懸浮生長,直徑約為20-30um,并且作著快速的旋轉(zhuǎn)運動,其速度有快有慢.細(xì)胞懸浮生長,周圍有較強的光暈.12小時,部分細(xì)胞出現(xiàn)有絲分裂相;24小時,部分圓形細(xì)胞一分為二;7-8天,細(xì)胞分裂形成細(xì)胞團.免

2、疫細(xì)胞化學(xué)的結(jié)果顯示,圓形細(xì)胞表現(xiàn)為Nestin反應(yīng)陽性,GFAP,NF-160反應(yīng)陰性實驗二皮層原代神經(jīng)元的分離培養(yǎng)和誘導(dǎo)分裂.目的:1、探討Wistar大鼠的神經(jīng)元的分離培養(yǎng)與鑒定方法.2、為脊髓橫斷模型的細(xì)胞移植提供足夠的神經(jīng)元.結(jié)果:接種6-12小時,細(xì)胞貼壁,呈圓形或橢圓形,細(xì)胞周圍有明顯的光暈2-3天后,細(xì)胞明顯增大,突起數(shù)增多,伸長.加入阿糖胞苷后培養(yǎng)三天,分裂細(xì)胞死亡,漂浮起來形成細(xì)胞團.除去阿糖胞苷,繼續(xù)培養(yǎng)10天左右

3、,神經(jīng)元的細(xì)胞核和核仁清晰可見,神經(jīng)突起多而粗大,網(wǎng)絡(luò)稠密.并且有許多神經(jīng)元出現(xiàn)雙核,分裂生成兩個神經(jīng)元MAP2+PI雙標(biāo)記呈陽性反應(yīng).實驗三神經(jīng)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染與神經(jīng)元HONC腿ST染色目的:1.探討:神經(jīng)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法與神經(jīng)元的HONCHEST染色方法.2.為動物實驗的細(xì)胞移植與追蹤提供細(xì)胞.結(jié)論:通過第一部分的實驗我們進一步完善了神經(jīng)干細(xì)胞及神經(jīng)元的培養(yǎng)方法,并成功的進行了神經(jīng)干細(xì)胞的GFP轉(zhuǎn)染及神經(jīng)元的HONCHEST染色.第二部

4、分動物實驗部分目的:1.探討細(xì)胞移植的方法與途徑.2.探討神經(jīng)干細(xì)胞對脊髓損傷與修復(fù)的作用與機制.3.探討神經(jīng)元對脊髓損傷與修復(fù)的作用與機制.4.比較二者的差別.結(jié)論:本實驗通過神經(jīng)干細(xì)胞及原代神經(jīng)元的培養(yǎng)成功獲取了高純度的細(xì)胞,其中神經(jīng)干細(xì)胞可穩(wěn)定傳代并形成克隆.利用獲得的細(xì)胞進行脊髓損傷移植實驗證實神經(jīng)干細(xì)胞對脊髓的損傷修復(fù)具有明顯作用,而移植的神經(jīng)元(原代培養(yǎng))盡管證明在動物體內(nèi)存活并發(fā)生遷移,但行為學(xué)指標(biāo)移植的4周內(nèi)并無明顯作用