小兒腦性癱瘓的臨床與分子遺傳學研究.pdf

1、第一部分：腦性癱瘓的臨床特征與發(fā)病相關因素分析
　　目的：分析腦癱的臨床特征并探討影響腦癱發(fā)病的相關因素。
　　方法：選擇2008年5月至2009年10月在鄭州大學第三附屬醫(yī)院腦癱康復治療中心、鄭州市兒童醫(yī)院腦癱科和河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腦癱科的住院腦癱病人374例。回顧性分析腦癱的臨床特征及可能的危險因素。
　　結果：1.性別和就診年齡:374例腦癱中,男性245例(65％％),女性129例(35％),男性患兒明顯

2、多于女性,男女之比為:1.9:1。就診年齡最小為3月,最大為120月,平均16.90±12.62月。就診年齡在0～3月、～6月、～12月、～24月、～48月和＞48月的患兒分別占全組病例的0％、17％、30％、29％、18％和6％。2.出生胎齡分布:出生胎齡＜30wks、～32wks、～34wks、～37wks和≥37wks的患兒分別占全組病例的6％、5％、7％、13％、69％。在腦癱的出生胎齡構成中以足月兒為主。3.出生體重分布:出生

3、體重＜1000g、～1500g、～2500g、～4000g和≥4000g的患兒分別占全組病例的0％、2％、22％、75％、1％。在腦癱的出生體重構成中以2500g-4000g為主。4.臨床類型:痙攣型最多211例(56％),其次為混合型47例(13％)、肌張力低下型45例(12％)、共濟失調型30例(8％)、不隨意運動型24例(6％)和分類不明17例(5％)。5.影像學表現(xiàn):158例有影像學資料(CT/MRI),其中有陽性發(fā)現(xiàn)者119例

4、,陽性率64.32％。腦室周圍白質軟化最多見為34例(28.57％,),其次為大腦發(fā)育不全33例(27.73％),外部性腦積水24例(20.17％),先天性腦發(fā)育異常14例(11.76％),側腦室擴大12例(10.08％),皮層萎縮2例(1.68％)。6.合并癥:在374例腦癱中有合并癥者170例(45.45％),其中最常見的是智力低下(29.7％)。7.發(fā)病危險因素:在374例腦癱中,133例(占35.6％)有與腦癱發(fā)病的相關危險因素

5、,新生兒缺氧缺血性腦病41.35％,早產28.57％,出生窒息7.54％為前三位原因。241例(64.4％)未發(fā)現(xiàn)有相關的危險因素。
　　結論：在已知的危險因素中,圍產期缺氧缺血和早產是腦癱發(fā)病的主要相關因素,然而尚有64.4％的病例沒有發(fā)現(xiàn)危險因素。提示我們不僅要進一步提高圍產保健和新生兒復蘇技術以降低腦癱的發(fā)病率,而且須進一步探討腦癱的其他危險因素。
　　第二部分：MTHFR基因多態(tài)性與腦性癱瘓的關聯(lián)性
　　目的：

6、探討亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與腦性癱瘓的關聯(lián)性。
　　方法：1.選擇2008年5月至2009年10月在鄭州大學第三附屬醫(yī)院腦癱康復治療中心、鄭州市兒童醫(yī)院腦癱科和河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腦癱科的住院腦癱病人159例(女50例,男109例,平均年齡16.9±14.4月)及同時期在其年齡和性別相匹配的來自鄭州大學第三附屬醫(yī)院兒童保健科健康體檢的正常兒童169例((女64例,男105例,平均年齡16.4±13.8月)。2.采用酚氯

7、仿法從靜脈血提取DNA,采用TaqManTM基因分型技術對所選取的MTHFR基因的5個SNPs(rs4846049、rs1476413、rs1801131、rs1801133和rS9651118)進行基因分型,然后采用在線軟件SHEsis(http://analysis.bio-x.cn)進行Hardy-Weinberg平衡檢測,并比較兩組單個位點等位基因和基因型頻率,采用SNPSpD軟件進行多重檢驗以及Haploview軟件進行單倍型

8、的分析,最后進行邦弗尼校正。
　　結果：1.Hardy-Weinberg平衡檢驗:所有5個SNPs(rs4846049,rs1476413,rs1801131,rs1801133,rs9651118)的基因型分布都符合Hardy-Weinberg平衡(p＞0.05)。2.關聯(lián)分析:所有5個SNPs的基因型及等位基因型頻率在腦癱和正常對照之間沒有顯著差異(p＞0.05)。進一步進行亞組分析發(fā)現(xiàn),在腦癱合并智力低下組和正常對照之間,3

9、個SNPs(rs4846049、rs1476413和rs1801131)的基因型及等位基因型頻率存在顯著差異(rs4846049,p=0.031;rs1476413,p=0.028;rs1801131p=0.014,p值均為SNPSpD校正后)。腦癱合并智力低下組rs2433322T等位基因頻率、rs1476413T等位基因頻率和rs1801131G等位基因頻率明顯高于正常對照。用5個SNPs位點構建單倍型,在單倍型分析中,發(fā)現(xiàn)單倍型T

10、TGGT與腦癱并智力低下有明顯的關聯(lián)性(p=0.001,OR=2.695,95％CI=1.470-4.941,p=0.005,邦弗尼校正后)。在出生胎齡小于37周腦癱組、出生體重小于2500g腦癱組、出生窒息腦癱組和正常對照之間,所有5個SNPs的基因型及等位基因型頻率沒有顯著差異(p均＞0.05)。
　　結論：我們的研究結果并不支持MTHFR基因的5個SNPs在中國漢族人群與腦癱相關聯(lián)。但我們發(fā)現(xiàn)3個SNPs與腦癱合并智力低下有

11、關聯(lián),因此,MTHFR基因多態(tài)性可能是腦癱合并智力低下的相關危險因素。
　　第三部分：AP4M1基因多態(tài)性與腦性癱瘓的關聯(lián)性
　　目的：探討AP4M1基因多態(tài)性與腦性癱瘓的關聯(lián)性。
　　方法：1.選擇2008年5月至2009年10月在鄭州大學第三附屬醫(yī)院腦癱康復治療中心、鄭州市兒童醫(yī)院腦癱科和河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腦癱科的住院腦癱病人159例(女50例,男109例,平均年齡16.9±14.4月)及同時期在其年齡和性別

12、相匹配的來自鄭州大學第三附屬醫(yī)院兒童保健科健康體檢的正常兒童169例((女64例,男105例,平均年齡16.4±13.8月)。2.采用酚氯仿法從靜脈血提取DNA,采用TaqManTM基因分型技術對所選取的AP4M1基因的4個SNPs(rs1534310、rs4729577、rs2293479和rs13309)進行基因分型,然后采用在線軟件SHEsis(http://analysis.bio-x.cn)進行Hardy-Weinberg平衡

13、檢測,并比較兩組單個位點等位基因和基因型頻率,采用SNPSpD軟件進行多重檢驗以及Haploview軟件進行單倍型的分析,最后進行邦弗尼校正。
　　結果：1.Hardy-Weinberg平衡檢驗:所有4個SNPs(rs1534310、rs4729577、rs2293479和rs13309)的基因型分布都符合Hardy-Weinberg平衡(p＞0.05)。2.關聯(lián)分析:所有4個SNPs的基因型及等位基因型頻率在腦癱和正常對照之間沒

14、有顯著差異(p＞0.05)。我們用4個SNPs位點構建單倍型,在單倍型分析中,沒有發(fā)現(xiàn)單倍型ACCT、ACTT、ATCA、ATTA和TCTT與腦癱的關聯(lián)性(p=0.410)。進一步進行亞組分析:所有4個SNPs的基因型及等位基因型頻率在腦癱并智力低下組、出生胎齡小于37周腦癱組、出生體重小于2500g腦癱組、出生窒息腦癱組與對照組之間沒有顯著差異(p＞0.05)。
　　結論：我們的研究發(fā)現(xiàn)AP4M1基因多態(tài)性在中國漢族人群與腦癱無

15、關聯(lián)。
　　第四部分：同卵雙生子腦癱患兒全基因組DNA甲基化的研究
　　目的：探討DNA甲基化對同卵雙生子腦性癱瘓的影響。
　　方法：研究對象:鄭州大學第三附屬醫(yī)院腦癱康復治療中心住院的2對雙生子(均為一個是腦癱患兒,一個是正常兒)作為研究對象。TwinpairⅠ:男,14月,1號(序號)為痙攣型雙癱,2號為正常兒;TwinpairⅡ:男,31月,5號為正常兒,6號為痙攣型四肢癱。采用酚氯仿法從靜脈血提取DNA,微衛(wèi)星

16、DNA基因分型技術進行雙生子卵性鑒定。采用MBD親和柱層析富集DNA甲基化片斷,繼而進行Solexa測序/生物信息學分析。
　　結果：1.卵形鑒定:9個STR在每對雙生子間的基因型完全一致,因此判定均為同卵雙生子。2.DNA高甲基化區(qū)域:發(fā)現(xiàn)每對雙生子腦癱和正常兒間存在不同的:DNA高甲基化區(qū)域,通過比較每對腦癱和正常兒間DNA甲基化狀態(tài)不同的片段,發(fā)現(xiàn)腦癱特異性的高甲基化區(qū)域分別為:1號:25440個;6號:103885個;正常

17、兒高甲基化區(qū)域分別為:2號:38772個;5號:3622個。將兩例腦癱或正常兒的高甲基化區(qū)域進行比較,我們發(fā)現(xiàn)腦癱共同甲基化的區(qū)域有10679個,而正常兒共同甲基化的區(qū)域為626個。選擇出腦癱共同甲基化的區(qū)域和正常兒共同甲基化的區(qū)域的蛋白編碼基因的啟動子,發(fā)現(xiàn)前者有661個,后者有41個。
　　結論：我們采用全基因組DNA甲基化分析技術對兩對同卵雙生子的腦癱和正常兒的血細胞進行了分析,選擇出了腦癱共同甲基化的的啟動子區(qū)域的蛋白編碼