PKCα和p38MAPK通路在電針刺介導(dǎo)的兔內(nèi)毒素休克急性肺損傷血紅素氧合酶-1表達上調(diào)中的作用.pdf

1、內(nèi)毒素休克急性肺損傷(acute lung injury，ALI)是臨床上常見的急危重癥，病死率高[1]。在內(nèi)毒素休克急性肺損傷的治療過程中，既往治療重點是抑制炎癥反應(yīng)和維持循環(huán)穩(wěn)定，但至今尚無理想的治療手段以改善其預(yù)后及降低死亡率[2]。電針刺以傳統(tǒng)針灸為基礎(chǔ)，在毫針刺入腧穴得氣后，針上通以脈沖電流，通過改變電刺激的強度、頻率、波幅、波寬、波形脈沖間隔等參數(shù)，進行行針治療。臨床和動物研究證實，針灸能增強機體免疫功能，改善微循環(huán)和能量代

2、謝紊亂[3]。前期研究表明，電針刺可通過上調(diào)血紅素氧合酶-1(HO-1)表達減輕脂多糖(LPS)引起的肺損傷程度，但具體機制尚不清楚[4]。蛋白激酶C(PKC)為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，失血性休克時，激活PKC通路能夠改善重要器官灌注和線粒體功能，維持血液動力學(xué)穩(wěn)定[5]。PKCα是PKC家族成員中作用最突出亞型[6]，研究表明黃芩素可通過激活PKCα通路上調(diào)HO-1表達，發(fā)揮細(xì)胞保護作用[7]。p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK

3、)是MAPK家族成員之一，激活后從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi)，是轉(zhuǎn)導(dǎo)真核細(xì)胞信號的重要通路[8]。在失血性休克誘發(fā)的小鼠非感染性急性肺損傷模型中，Toll樣受體4(TLR4)可誘導(dǎo)HO-1表達，進而促進機體分泌抗炎因子， p38MAPK通路參與了此誘導(dǎo)表達過程[9]。PKCα和p38MAPK通路是否參與電針刺介導(dǎo)的兔內(nèi)毒素休克急性肺損傷時HO-1表達，尚無文獻報道。
　　目的本研究擬探討PKCα和p38MAPK信號通路在電針刺介導(dǎo)的兔內(nèi)毒

4、素休克急性肺損傷時HO-1表達上調(diào)中的作用。
　　方法健康雄性新西蘭大白兔140只，體重1.5～2.0 kg，2月齡，實驗分成兩部分進行，每部分70只，均采用隨機數(shù)字表法，將其分為7組(n=10)，第一部分:假手術(shù)組(S)、無水乙醇組(AL)、PKC阻斷劑白屈菜赤堿組(CHE)、內(nèi)毒素休克急性肺損傷組(L)、電針刺+內(nèi)毒素休克急性肺損傷組(EA)、假針刺+內(nèi)毒素休克急性肺損傷組(NEA)、電針刺+內(nèi)毒素休克急性肺損傷+白屈菜赤堿組

5、(EAC)。第二部分:假手術(shù)組(S)、無水乙醇組(AL)、p38MAPK特異阻斷劑SB203580組(SB)、內(nèi)毒素休克肺損傷模型組(M)、電針刺+內(nèi)毒素休克肺損傷模型組(EAM)、假針刺+內(nèi)毒素休克肺損傷模型組(SEAM)、電針刺+內(nèi)毒素休克肺損傷模型+SB203580組(EAMS)。EA組、EAC組和EAM組、 EAMS組電針刺激雙側(cè)足三里和肺俞穴，疏密波，頻率2/15 Hz，刺激強度1～2mA，以兔出現(xiàn)輕微肌顫為宜，30 min/

6、次，1次/d，連續(xù)5d（1～4d進行電針刺預(yù)處理），實驗當(dāng)天電針刺激從給予LPS持續(xù)至實驗結(jié)束;NEA組和SEAM組刺激雙側(cè)足三里和肺俞穴旁開0.5 cm非經(jīng)非穴處。L組、EA組、NEA組、EAC組和M組、SEAM組、EAM組、EAMS組耳緣靜脈注射LPS5 mg/kg(溶于2 ml生理鹽水)，其余組給予等容量生理鹽水。在靜脈注射LPS或生理鹽水前0.5 h，EAC組和CHE組腹腔注射白屈菜赤堿8 mg/kg（溶于0.5 ml無水乙醇中

7、），SB組和EAMS組靜脈注射SB2035805μmol/kg（溶于0.5ml無水乙醇），S組靜脈注射等容量生理鹽水，其余各組靜脈注射無水乙醇0.5 ml。靜脈注射LPS各組以MAP在2h內(nèi)下降至基礎(chǔ)值75％為模型成功標(biāo)志。靜脈注射LPS（或生理鹽水）6h時，右頸內(nèi)動脈取血，測定血清TNF-α濃度，處死大白兔取肺組織，觀察病理學(xué)結(jié)果并進行病理學(xué)評分，測定肺濕/干重比率(W/D)以及MDA含量和SOD活性;采用western blot法測

8、定HO-1和PKCα（第一部分）或p38MAPK、p-p38MAPK（第二部分）蛋白表達;采用熒光定量PCR法測定HO-1mRNA和PKCα mRNA(第一部分)表達。
　　結(jié)果與假手術(shù)組比較，給予LPS各組肺組織損傷加重，HO-1表達上調(diào)，肺組織PKCα表達水平（第一部分）和p38MAPK磷酸化水平（第二部分）除針刺加阻斷劑組以外其余各組升高（P均＜0.05），針刺加阻斷劑組水平變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。與內(nèi)毒素休

9、克致肺損傷模型組比較，電針刺處理后肺組織損傷減輕，HO-1和PKCα（第一部分）表達上調(diào)、p38MAPK磷酸化水平（第二部分）升高，而再給予阻斷劑后與之比較第一部分肺組織損傷減輕，第二部分肺組織損傷加重，HO-1、PKCα表達和p38MAPK磷酸化水平下調(diào)（P均＜0.05），假針刺組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;與電針刺組比較，再給予阻斷劑后兩部分肺組織損傷均加重，且出現(xiàn)HO-1表達和PKCα表達（第一部分）下調(diào)，p38MA