交換形成相關(guān)基因的RNAi載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜研究.pdf

1、減數(shù)分裂中，同源染色體相互識(shí)別、配對(duì)后在非姊妹染色單體間發(fā)生片段交換，導(dǎo)致同源重組的發(fā)生。同源重組是生物多樣性產(chǎn)生的重要來(lái)源之一。近年來(lái)，隨著研究者對(duì)模式植物擬南芥、水稻減數(shù)分裂機(jī)制的深入研究，越來(lái)越多的參與交換形成的基因被發(fā)掘，使得人工調(diào)控交換的發(fā)生及其頻率成為可能，在作物遺傳育種中具有重要的潛在應(yīng)用價(jià)值。甘藍(lán)型油菜（Brassica napus，AACC）為白菜(B.rapa，AA)與甘藍(lán)(B.oleracea，CC)雜交形成的異源

2、四倍體，是我國(guó)重要的油料作物之一。由于缺少天然及人工突變體，對(duì)其減數(shù)分裂調(diào)控機(jī)制的研究鮮有報(bào)道。本研究的主要目的是利用RNAi技術(shù)降低甘藍(lán)型油菜中相關(guān)基因（均為擬南芥減數(shù)分裂中參與交換形成的同源基因）的表達(dá)，分析甘藍(lán)型油菜減數(shù)分裂中交換形成的分子機(jī)制，并為通過(guò)同源/部分同源重組引入野生近緣種優(yōu)異基因建立材料基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
　　1)利用RT-PCR擴(kuò)增，從甘藍(lán)型油菜Westar中獲得FIGL1、MHF1、XRCC2、ASY1和

3、MUS81目標(biāo)干涉區(qū)段。以質(zhì)粒pFGC-5941為骨架，構(gòu)建了上述五個(gè)基因的RNAi載體，并通過(guò)酶切與測(cè)序驗(yàn)證。
　　2)利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，以下胚軸為外植體，將上述載體分別轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型油菜Westar、J9709和JW76中，抗性篩選后共得到再生植株78株。
　　3)對(duì)其中66株進(jìn)行PCR凇測(cè)，共鑒定到陽(yáng)性植株48株，平均轉(zhuǎn)化效率為72.73％。其中帶有FIGL1載體陽(yáng)性植株25株，MHF1陽(yáng)性株8株，XRCC2陽(yáng)