含CpG基序的新型單純皰疹病毒Ⅱ型DNA疫苗研究.pdf

1、單純皰疹病毒感染是人類比較常見的感染性疾病，HSV-2主要引起生殖器感染，它是引發(fā)生殖器皰疹和潰瘍最主要的原因，是一個(gè)世界性的公共衛(wèi)生問題。目前用于生殖器皰疹治療的藥物主要為核苷類抗病毒藥物，雖然可以取得較好的治療效果，但是無法清除病毒，因此不能徹底治愈感染，無法有效控制HSV-2的復(fù)發(fā)。 近來，科學(xué)家們做了大量的努力進(jìn)行HSV疫苗的研制，以期能夠控制HSV的感染。一些候選疫苗也已經(jīng)在各類模型中進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。專家們認(rèn)為研制有效的H

2、SV疫苗，激發(fā)機(jī)體抗HSV感染免疫作用，調(diào)動(dòng)體內(nèi)細(xì)胞免疫和體液免疫功能，以清除HSV感染，可能是目前預(yù)防和治療HSV的理想方法。 本研究中我們構(gòu)建了一個(gè)含卡那霉素抗性基因的真核表達(dá)質(zhì)粒載體，然后以此為基礎(chǔ)構(gòu)建含HSV-2糖蛋白D全基因序列的HSV-2DNA疫苗。同時(shí)構(gòu)建含CpG基序的DNA疫苗免疫佐劑，并聯(lián)合HSV-2DNA疫苗免疫小鼠，觀察CpG佐劑對(duì)HSV-2DNA疫苗的免疫促進(jìn)作用。 方法： 通過PCR擴(kuò)增

3、和連接重組從質(zhì)粒pET-28a(+)和質(zhì)粒pcDNA3獲得一個(gè)新的含卡那霉素抗性真核表達(dá)質(zhì)粒載體。通過PCR從重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-gD上擴(kuò)增出HSV-2糖蛋白D全基因序列，克隆入新構(gòu)建的質(zhì)粒載體pcDNAkan獲得HSV-2DNA疫苗pgD。設(shè)計(jì)并合成一段含CpG基序的DNA片斷，克隆入質(zhì)粒載體pcDNAkan，獲得DNA疫苗免疫佐劑pCpG，同時(shí)合成一段CpGODN，分別以pCpG和CpGODN為佐劑聯(lián)合DNA疫苗pgD免疫

4、小鼠，觀察和比較它們對(duì)小鼠的免疫效果及保護(hù)作用。 結(jié)果： 小鼠經(jīng)免疫接種三次后，血清ELISA檢測(cè)IgG結(jié)果顯示pgD+pCpG組最高，略高于pgD組和pgD+CpGODN組，與空質(zhì)粒對(duì)照組相比具有顯著性差異(P＜0.01)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)血液CD4+T淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果顯示pgD+pCpG組最高，與其它各組相比較均有顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論： pCpG能促進(jìn)pgD誘導(dǎo)更為強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫反應(yīng)，為獲