沙眼衣原體E型DNA疫苗免疫效應的研究.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis C.t)所致的非淋球菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis，NGu)是最常見的性傳播疾病(STD，sexuallytransmitted diseases)。其感染所引起的的前列腺炎、不孕不育、異位妊娠、慢性盆腔炎等嚴重危害著患者的身心健康。對C.t感染的研究已成為當今國內外研究的熱點之一，C.t的預防和控制方法亟待改進。沙眼衣原體疫苗的研究便是預防措施中的

2、重點之一。在眾多研究的C.t疫苗中，DNA疫苗憑借其不可比擬的優(yōu)勢成為發(fā)展的方向。遺憾的是到目前為止仍然沒有成功的疫苗問世。 目的：研究感染泌尿生殖道的C,t優(yōu)勢型-E型的DNA疫苗在小鼠體內誘發(fā)的免疫應答和免疫保護作用。 方法：本研究以沙眼衣原體(C.t)細胞培養(yǎng)技術為基礎，將C.t E血清型在McCoy細胞中培養(yǎng)，并經過連續(xù)傳代使C.t增量。以4～5周齡BALB/c小鼠為實驗動物，將小鼠分為接種空質粒的陰性對照組、D

3、NA疫苗單獨免疫組和接種滅活C.t E型原體的陽性對照組。分別于第0、2、4周雙側股四頭肌肌肉接種，實驗組接種本實驗室所構建的DNA疫苗免疫，陰性對照組小鼠接種空質粒，陽性對照組接種滅活C.t E型原體同時輔以完全弗氏佐劑與不完全弗氏佐劑。第6周采集小鼠血清和生殖道分泌物沖洗液以檢測血清和局部C.t特異性抗體、細胞因子、抗體中和試驗；同時對部分小鼠進行遲發(fā)型超敏反應實驗并處死采集其脾臟以完成脾淋巴細胞增殖試驗。剩余部分右股部肌肉注射黃體

4、酮以增強小鼠對C.t感染的敏感性。第7周用C.t E型原體從生殖道感染小鼠。第8周采集小鼠生殖道脫落細胞并進行小鼠生殖道C.t的免疫熒光檢測與培養(yǎng)和計數。第9周取小鼠靜脈血、生殖道分泌物沖洗液、脾淋巴細胞和小鼠完整子宮標本，檢測其抗體、細胞因子、脾淋巴細胞增殖情況及宮頸組織病理，從而研究所構建的C.t E型DNA疫苗的免疫效應。 結果： (1)C.t E型株成功培養(yǎng)并定量，結果顯示，所有的孔板90％以上細胞感染，收集6孔

5、板的C.t懸液，高速離心后得到的C.t EB懸液其濃度為2.1750×10<'7>IFU/mlIFU/mL，考馬斯亮藍法進行C.t EB蛋白定量顯示蛋白濃度為3081.7μg/ml。 (2)生殖道C．tEB的攻擊前后，檢測血清抗體、細胞因子IFN-γ、抗體中和試驗、小鼠進行遲發(fā)型超敏反應及脾淋巴細胞增殖試驗示所構建的C.tE型DNA疫苗單獨免疫小鼠能夠誘導產生一定的C.t特異性細胞免疫和體液免疫。 (3)生殖道分泌物衣原

6、體免疫熒光測定、小鼠生殖道C.t培養(yǎng)和計數、組織病理活檢示陰性對照組小鼠感染C.t，而陽性對照組與實驗組未感染。 結論： (1)所構建的C.t E型DNA疫苗單獨免疫小鼠能夠誘導產生一定的C.t特異性細胞免疫和體液免疫。 (2)實驗動物針對C.tompl基因所編碼的主要外膜蛋白(major outer membrane protein，MOMP)產生的抗體是保護性抗體，具有中和能力。 (3)構建的C.t