非小細(xì)胞肺癌PCNA、ki-67和p53表達(dá)的研究.pdf

1、研究背景及目的：肺癌是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一，男性中占第一位，女性中占第二位，是嚴(yán)重威脅人們健康和生命的疾病。非小細(xì)胞肺癌(non-smallcelllungcarcinoma，NSCLC)占所有肺癌的60～80％。細(xì)胞增殖失控是惡性腫瘤的重要特征，細(xì)胞的增殖潛能對(duì)腫瘤的診治及預(yù)后的判斷有重要價(jià)值。NSCLC同其他惡性腫瘤一樣，存在增殖失控，因此研究NSCLC的細(xì)胞增殖狀況是NSCLC研究的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)[1]，增殖細(xì)胞核抗原(

2、Proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)是一種由261種氨基酸組成的蛋白質(zhì)，是DNA聚合酶δ的輔助蛋白，它的合成與DNA復(fù)制和細(xì)胞增殖直接相關(guān)。在靜止期細(xì)胞中含量很少，G1晚期開始增加、S期達(dá)到高峰，G2、M期明顯下降，是控制DNA復(fù)制以及細(xì)胞分裂的關(guān)鍵因素，因此它的表達(dá)程度反映了細(xì)胞增殖活性的高低。Ki-67是一種與DNA結(jié)合的核內(nèi)蛋白，屬于非組蛋白蛋白質(zhì)，其出現(xiàn)于細(xì)胞周期的G1后期，在S期和G1期逐

3、漸升高，M期達(dá)到高峰，有絲分裂后迅速降解消失，而不存在于G0期細(xì)胞；所以Ki-67也是細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白，用于區(qū)分細(xì)胞生長與否、反映細(xì)胞增殖活性的高低。p53是目前研究最多的抑癌基因之一，它的生化功能為調(diào)節(jié)因子，對(duì)細(xì)胞周期中的增殖細(xì)胞具有調(diào)控作用，能控制G1期細(xì)胞進(jìn)入S期，從而抑制細(xì)胞的增殖?，F(xiàn)已知人類多種惡性腫瘤(包括肺癌)中存在p53基因突變。p53基因突變后，發(fā)生野生型p53等位基因缺失，使p53喪失了原本的腫瘤抑制功能，從而讓受損

4、細(xì)胞未經(jīng)檢測而繼續(xù)分裂、增殖，最后導(dǎo)致腫瘤的形成[5]。但是，在以前的研究中，單獨(dú)或兩項(xiàng)檢測細(xì)胞增殖相關(guān)指標(biāo)PCNA、Ki-67、p53在NSCLC中的表達(dá)狀況及意義尚存在爭議；而有關(guān)PCNA、Ki-67、p53在NSCLC聯(lián)合檢測三者的表達(dá)的研究甚少。因此，本研究旨在探討PCNA、Ki-67、p53在NSCLC中的表達(dá)及聯(lián)合表達(dá)的意義，為臨床診治及預(yù)后判斷提供幫助。 對(duì)象與方法：用S-P法免疫組化檢測135例NSCLC患者手術(shù)

5、切除后石蠟包埋標(biāo)本及對(duì)照組12例正常肺組織(距離腫塊邊緣5CM以上正常肺組織或另一葉正常肺組織)PCNA、Ki-67、p53的表達(dá)，分析其與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系。所有病例均來自于寧波市李惠利醫(yī)院住院病人手術(shù)切除標(biāo)本，經(jīng)組織病理學(xué)診斷為原發(fā)性非小細(xì)胞型支氣管肺癌。男106例，女29例，年齡38～81歲，平均年齡59.9歲；鱗癌73例，腺癌57例，其他5例。按UICC1997年肺癌術(shù)后病理分期(pathologicaitumor,n

6、odes,metastasis-classification，pTNM)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期42例，Ⅱ期36例，Ⅲa期48例，Ⅲb期及以上9例。 所有石蠟包埋組織標(biāo)本均切成4μm厚的切片，常規(guī)脫蠟至水化。采用S-P法行免疫組織化學(xué)染色。用已知的陽性肺癌組織切片同時(shí)同一條件下染色作為陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。由兩名病理醫(yī)生分別計(jì)數(shù)其中的陽性細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)，取其平均值。陽性細(xì)胞所占的比率即為PCNA、Ki-67、p53蛋白表達(dá)

7、陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，也即分別是PCNA、Ki-67、p53表達(dá)指數(shù)。采用DworakowskaD[5]判別標(biāo)準(zhǔn)，PCNA表達(dá)指數(shù)≥10％為陽性、＜10％為陰性；Ki-67表達(dá)指數(shù)≥10％為陽性、＜10％為陰性；p53表達(dá)指數(shù)≥10％為陽性、＜10％為陰性進(jìn)行分組對(duì)比研究。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)用SPSS11.5FORWINDOWS統(tǒng)計(jì)軟件分析，組間的比較采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1PCNA、Ki-6

8、7、p53三者在腫瘤組織中表達(dá)明顯增高，與對(duì)照組織比較，有顯著性差異(p＜0.05)。 2PCNA、Ki-67與p53在NSCLC腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)陽性率由高到低依次為PCNA、Ki-67與p53。PCNA、Ki-67與p53表達(dá)陽性率均顯示鱗癌高于腺癌。 3PCNA陽性率為鱗癌80.2％，腺癌77.2％。PCNA隨腫瘤增大表達(dá)率增高，腫瘤以直徑5厘米為界限分組時(shí)，顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。PCNA在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組

9、的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本研究分別對(duì)年齡界限(50歲，50～70歲，70歲)分三組進(jìn)行對(duì)比研究，結(jié)果在≤50歲組PCNA、Ki-67陽性率比＞50歲組高，提示≤50歲組肺癌細(xì)胞的增殖活性比＞50歲組高，但差別沒有顯著性(p＞0.05)。PCNA在病理分型、分化程度、術(shù)后病理分期等的對(duì)比中無顯著差異(p＞0.05)。 4Ki-67陽性率為鱗癌61.4％，腺癌50.9％；在年齡、病理分型、分化程度、腫瘤大小、

10、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)后病理分期等的對(duì)比中均無顯著差異(p＞0.05)。 5p53的陽性率為鱗癌60.3％，腺癌40.4％；年齡較輕組(≤50歲)p53陽性表達(dá)率增高；另外，鱗癌患者組的p53陽性表達(dá)率增高，但未顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。p53在病理分型、分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)后病理分期(pTNM)等的對(duì)比中均無顯著差異。 6PCNA、Ki-67與p53在NSCLC腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)有一定相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)0.2

11、64～0.397)。 結(jié)論：1PCNA、Ki-67、p53三者在NSCLC中表達(dá)明顯高于對(duì)照組織，顯示有顯著性差異(p＜0.05)。 2PCNA在腫瘤直徑＞5cm者表達(dá)明顯增高，提示NSCLC腫瘤越大細(xì)胞增殖活性越高。 3PCNA、Ki-67、p53在鱗癌中的表達(dá)均高于腺癌，提示鱗癌細(xì)胞增殖活性高于腺癌。 4在NSCLC細(xì)胞增殖活性檢測中，表達(dá)陽性率由高到低依次為PCNA、Ki-67、p53。PCNA、K