桑葉多糖的分離表征修飾及降血糖活性的研究.pdf

1、桑葉是我國傳統(tǒng)中藥中“藥食同源”的優(yōu)良品種，主要含有黃酮類、多糖類、生物堿類等化合物。其具有多種生物活性及臨床應(yīng)用，主要用于治療糖尿病，高血壓等病癥。
　　桑葉多糖作為桑葉中重要的一類降血糖成分，得到了國內(nèi)外學(xué)者的高度關(guān)注。但是目前有關(guān)桑葉多糖的研究，大部分集中在對桑葉多糖的提取、初分離和體內(nèi)外活性測定方面，鮮有對桑葉多糖的結(jié)構(gòu)研究的報道，尤其是對桑葉多糖中單糖鏈接的方式、構(gòu)象以及相對分子質(zhì)量的研究更是少見。本文以桑葉微波輔助水提

2、物為研究對象，采用脫蛋白、脫色、醇沉等粗分離手段和Sephadex凝膠過濾層析的方法分離得到兩種不同相對分子質(zhì)量段的桑葉純多糖MPL1和MPL2，并采用了GPC、IR、GC及高碘酸氧化和Smith降解等手段，對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。采用體外α-葡萄糖苷酶抑制劑篩選模型，研究桑葉多糖對α葡萄糖苷酶活性的抑制作用。最后對桑葉多糖的磷酸化分子修飾進(jìn)行了初步的研究。
　　1、通過Sephadex凝膠過濾層析，分離純化得到桑葉多糖MPL1和MP

3、L2，并用高效凝膠色譜(HPGPC)和示差檢測器檢測其純度分別為94.55％和96.64％。該方法方法簡便，快捷，可對桑葉多糖的純度進(jìn)行快速的定性和定量分析，為其結(jié)構(gòu)的表征奠定基礎(chǔ)。
　　2、利用HPGPC與多角度激光光散射檢測器連用分析桑葉多糖兩個組分MPL1和MPL2的重均相對分子質(zhì)量分別為11800Da和7630Da。利用GC分析MPL1和MPL2是由D-果糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-木糖和D-葡萄糖五種單糖組成，其摩

4、爾比分別為58∶9.9∶5.8∶5.1∶21.2和45∶6.7∶17.2∶7.3∶24.1。而通過經(jīng)典的高碘酸氧化和Smith降解反應(yīng)的方法得到MPL1和MPL2的主鏈?zhǔn)怯?→3位鍵合的糖基組成，支鏈為1→2位鍵合的糖基組成。紅外光譜分析桑葉多糖中存在α構(gòu)型的C-H吸收峰。獲得了較全面的桑葉多糖的結(jié)構(gòu)信息。
　　3、建立并優(yōu)化了桑葉多糖干熱磷酸化的實驗方法，在最佳工藝為:干熱溫度72℃，加熱時間15h，鹽濃度0.15mol/L，p

5、H4.86的條件下，磷含量可高達(dá)12.13％。該方法具有簡單、經(jīng)濟、成本低、不易發(fā)生變性等優(yōu)點。
　　4、通過體外抑制α-葡萄糖苷酶的實驗，測定MPL1和MPL2對蔗糖底物的IC50值分別為89.1μg/mL和70.8μg/mL，對麥芽糖底物的IC50值分別為362μg/mL和422μg/mL。其降血糖活性分別是粗多糖的55倍和69倍。60％經(jīng)過磷酸化修飾后的桑葉多糖比未經(jīng)過修飾的桑葉粗多糖對α-葡萄糖苷酶的抑制活性都有明顯的提高