慢性粒細(xì)胞白血病患者嗜堿性粒細(xì)胞的新探索.pdf

1、目的： 眾所周知，慢性粒細(xì)胞白血病患者骨髓及外周血中嗜堿性粒細(xì)胞的異常增多是其預(yù)后不良的指標(biāo)。同時，干擾素α治療慢性粒細(xì)胞白血病有效的一個標(biāo)志就是嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量的減少。近年來，隨著對漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cell，pDC)--干擾素專職產(chǎn)生細(xì)胞研究的深入，慢性粒細(xì)胞白血病患者體內(nèi)漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞的異常及其與慢性粒細(xì)胞白血病療效、預(yù)后的關(guān)系逐漸成為關(guān)注的焦點。有動物試驗研究發(fā)現(xiàn)，單純

2、從細(xì)胞形態(tài)學(xué)上所認(rèn)定的嗜堿性粒細(xì)胞并不具有目前國際上所認(rèn)定的嗜堿性粒細(xì)胞的分子表型。那么，慢性粒細(xì)胞白血病患者體內(nèi)異常增多的嗜堿性粒細(xì)胞是真正意義上的嗜堿性粒細(xì)胞嗎?它與體內(nèi)的漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞有何關(guān)系?這正是本課題研究的意義所在。 方法： 選擇經(jīng)血液學(xué)，骨髓象，染色體及分子學(xué)檢查，確診為慢性粒細(xì)胞白血病慢性期，干擾素α治療有效，干擾素α治療無效加速期或急變期的患者，分為三組，利用Ficoll密度梯度離心法分離三組患者骨

3、髓單個核細(xì)胞，再將所得細(xì)胞利用聚蔗糖一泛影葡胺法(polyglucosan-diatrizoate)進(jìn)行形態(tài)學(xué)意義上的“嗜堿性粒細(xì)胞”的分離，涂片染色，倒置顯微鏡及光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，進(jìn)行嗜堿性粒細(xì)胞計數(shù)的統(tǒng)計學(xué)檢驗；利用包被了FcεRI單克隆抗體的磁珠進(jìn)行免疫磁珠分選，對細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的純化。之后，將所得細(xì)胞以漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞的表型進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測，對比三組患者中所謂的“嗜堿性粒細(xì)胞”具有漿樣樹突狀細(xì)胞表型的比例，做統(tǒng)計學(xué)檢驗判斷其

4、顯著性。 結(jié)果： CML-MNC在經(jīng)過聚蔗糖-泛影葡胺法分離后，嗜堿性粒細(xì)胞純度達(dá)到90％以上，瑞氏-吉姆薩染色光鏡下可見直徑10-14μm的單個核細(xì)胞，其細(xì)胞核內(nèi)包含有濃縮的染色質(zhì)，這種細(xì)胞核，我們形象的稱之為“三葉草”或“奶油糕點”，胞核分葉不清楚，胞質(zhì)含形狀不規(guī)則、大小不等的嗜堿性顆粒。其中，急變期組或干擾素治療無效組“嗜堿性粒細(xì)胞”計數(shù)明顯較慢性期組與干擾素治療有效組明顯增加。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志，在這種形

5、態(tài)學(xué)認(rèn)定的“嗜堿性粒細(xì)胞”中發(fā)現(xiàn)具有一定數(shù)量的表達(dá)pDC表面標(biāo)志的細(xì)胞，而該種標(biāo)志又與國際公認(rèn)的嗜堿性粒細(xì)胞的標(biāo)志有著明顯的區(qū)別。隨著疾病進(jìn)展，該種表達(dá)pDC表面標(biāo)志的細(xì)胞含量明顯減少。不同的疾病進(jìn)展期，所占數(shù)量不同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：1.慢性粒細(xì)胞白血病患者體內(nèi)分離出的形態(tài)學(xué)認(rèn)定的“嗜堿性粒細(xì)胞”，其含量百分比隨著疾病的進(jìn)展而增加，隨療效的提高而減少。 2.慢性粒細(xì)胞白血病患者體內(nèi)分離出的形態(tài)學(xué)