HYAL基因沉默對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖和侵襲的影響.pdf

1、目的：觀察RNA干擾HYAL基因?qū)β殉舶㏒KOV3細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響。 方法：采用RT-PCR方法研究卵巢癌SKOV3細(xì)胞中HYAL1、HYAL2、HYAL3基因表達(dá)情況，并針對(duì)表達(dá)量高的HYAL的基因設(shè)計(jì)合成siRNA，并篩選一對(duì)有效的siRNA。轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞后，RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后HYAL基因的mRNA表達(dá)情況，MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染siRNA后SKOV3細(xì)胞增殖的變化、流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染siRNA后SKOV3細(xì)胞的

2、細(xì)胞周期變化。并構(gòu)建體外侵襲模型，觀察siRNA-HYAL對(duì)SKOV3細(xì)胞侵襲能力的影響。 結(jié)果：卵巢癌SKOV3細(xì)胞HYAL2/β-actin OD比值(0.64±0.0177)明顯高于HYAL1/β-actin OD比值(0.3478±0.0322)和HYAL3/β-actinOD比值(0.4036±0.0246)，其P<0.05，轉(zhuǎn)染siRNA-HYAL2后HYAL2基因mRNA表達(dá)水平明顯降低。MTT顯示轉(zhuǎn)染siRNA-

3、HYAL2后卵巢癌SKOV3細(xì)胞平均A值(0.6706±0.0197)比陰性對(duì)照組1平均A值(0.8878±0.0225)和陰性對(duì)照組2平均A值(0.8884±0.0345)降低(P<0.05)，流式細(xì)胞儀顯示轉(zhuǎn)染siRNA-HYAL2組的S期細(xì)胞百分比(18.7140±0.6129)較陰性對(duì)照組1(27.8820±0.7524)、陰性對(duì)照組2(28.7140±0.9711)及空白對(duì)照組(28.8640±0.8206)降低(P<0.05

4、)，實(shí)驗(yàn)組G<,0>-G<,1>期細(xì)胞百分比(77.2580±1.2968)較陰性對(duì)照組1(67.4800±1.1836)、陰性對(duì)照組2(67.3360±1.0788)及空白對(duì)照組(66.2040±1.0846)升高(P<0.05)。而陰性對(duì)照組1、陰性對(duì)照組2及空白對(duì)照組之間G<,0>-G<,1>期和S期之間無(wú)明顯差異(P>0.05)。轉(zhuǎn)染siRNA-HYAL2后平均穿膜細(xì)胞數(shù)(42.6000±7.1624)比陰性對(duì)照組1平均值(14

5、5.4000±17.8410)、陰性對(duì)照組2平均值(143.8000±15.6109)和空白對(duì)照組平均值(146.2000±16.8434)少(P<0.05)；而陰性對(duì)照組1平均值、陰性對(duì)照組2平均值和空白對(duì)照組平均值之間的差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 結(jié)論：卵巢癌SKOV3細(xì)胞主要表達(dá)HYAL2，siRNA-HYAL2能特異性抑制HYAL2的mRNA表達(dá)水平。RNA干擾HYAL基因?qū)β殉舶㏒KOV3增殖和侵襲能力有抑制作用，