腺伴隨病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的基因治療新途徑研究.pdf

1、目的:腺伴隨病毒載體是目前進(jìn)行的基因治療探索中唯一安全性和療效穩(wěn)定的病毒載體。其血清型有8種，不同的血清型由于其包殼蛋白的不同而對不同的組織細(xì)胞有不同的感染效率。目前對其感染進(jìn)入細(xì)胞的機(jī)制仍不清楚，而應(yīng)用較多的是血清型2型腺伴隨病毒載體。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為一種成體干細(xì)胞，來源于骨髓，對于維持骨髓的造血微環(huán)境及機(jī)體的造血功能起著非常重要的作用。它經(jīng)體外分離培養(yǎng)增殖后，20代內(nèi)其干細(xì)胞的特性不發(fā)生改變，同時體外擴(kuò)增培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)

2、過靜脈回輸后，可回巢定位到造血器官如：骨髓、肝、脾等部位。且諸多證據(jù)證明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外可被作為基因轉(zhuǎn)染的靶細(xì)胞。而目前應(yīng)用腺伴隨病毒載體對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染的研究尚未展開。重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子，在血液系統(tǒng)疾病的治療中廣為應(yīng)用。能否將重組腺伴隨病毒載體和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的特點結(jié)合起來，使粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子能夠長期穩(wěn)定的在體內(nèi)表達(dá)?因此，設(shè)想將重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因和鼠粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因作為靶

3、基因，克隆到重組腺伴隨病毒載體上，探索帶有重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因和鼠粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因的重組腺伴隨病毒載體在體外能否有效轉(zhuǎn)導(dǎo)到人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。并觀察其在體外，和體內(nèi)的表達(dá)情況。從而，為腺伴隨病毒載體和骨髓間質(zhì)干細(xì)胞在惡性血液病的基因治療方面的應(yīng)用做一點探索性工作。 結(jié)論: 1、來源于白血病病人的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與來源于正常健康成人的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞從本質(zhì)上無差別。作為細(xì)胞治療及基因治療的良好載體有望以后

4、應(yīng)用于臨床； 2、重組腺伴隨病毒載體對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率低，經(jīng)過重組腺伴隨病毒載體轉(zhuǎn)移的基因可在體外長期表達(dá)，但隨著細(xì)胞傳代逐漸衰減。經(jīng)回輸體內(nèi)后有望獲得長期穩(wěn)定表達(dá)。這一技術(shù)是基因治療，尤其是對惡性血液病治療的一條新途徑。但目前阻礙其進(jìn)一步應(yīng)用的壁壘可能是其低的體外轉(zhuǎn)染效率； 3、經(jīng)過重組腺伴隨病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的來源于急性髓性白血病患者骨髓的間充質(zhì)干細(xì)胞，仍具有其多向分化能力，經(jīng)過體外培養(yǎng)擴(kuò)增回輸裸鼠體內(nèi)后，裸鼠未發(fā)生