青枯無致病力菌株對煙草青枯病的室內(nèi)控病研究.pdf

1、煙草青枯病是由勞爾氏菌屬的茄假單胞桿菌Ralstonia solanacearum引起的一種系統(tǒng)性侵染病害，對煙草的產(chǎn)量和質(zhì)量影響極大，是煙草上一大毀滅性病害，其防治十分困難。生物防治對煙葉生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展具有較好的應(yīng)用前景。利用青枯無致病力菌株作為生防菌，它們能夠在與病原菌相似的生態(tài)條件下發(fā)揮作用，且對生態(tài)環(huán)境的影響很小。本研究從重慶不同區(qū)縣采集茄、番茄、煙草和辣椒青桔病株分離青桔無致病力菌株，并通過紫外光誘變和連續(xù)轉(zhuǎn)代青枯致病菌獲取

2、無致病力菌株。對這些菌株進行平板拮抗篩選及溫室控病試驗，并對它們誘導(dǎo)煙草植株體內(nèi)防御酶系活性及病程相關(guān)蛋白變化進行了測定。 1.從2006年6月初至9月底，在重慶市璧山縣、北碚區(qū)、九龍坡區(qū)白市驛鎮(zhèn)、江津區(qū)、酉陽縣和涪陵區(qū)采集青枯病株樣本共184份，其中茄青枯病株67份，番茄青枯病株42份，煙草青枯病株38份，辣椒青桔病株37份。分離純化保存并初步鑒定菌株共138株，其中青枯致病菌株22株，占獲得的青枯菌株總數(shù)的16％。22株青枯

3、致病菌株中，茄青枯菌13株，煙草青枯菌6株，番茄青枯菌2株，辣椒青枯菌1株。無致病力菌株116株，占獲得的青枯菌株總數(shù)的84％，其中番茄青枯菌41株，茄青枯菌41株，辣椒青枯菌21株，煙草青枯菌13株。 2.將直接分離得到的青枯無致病力菌株116株，通過紫外光誘變得到的青枯無致病力菌株42株，及連續(xù)轉(zhuǎn)代獲得的青枯無致病力菌株19株，對它們進行煙草青枯菌的平板抑菌試驗。初篩得到對煙草青枯菌有抑菌活性的菌株共62株，其中61株為直接

4、分離得到的菌株，1株為紫外光誘變得到。進行復(fù)篩后得到抑菌帶寬≥1 cm的菌株21株；抑菌帶寬為0.5～1 cm的菌株13株；抑菌帶寬度≤O.5 cm的菌株28株。將抑菌帶寬≥1 cm的菌株采用噴霧法和含菌培養(yǎng)基法兩種篩選方法比較。結(jié)果表明：采用噴霧法得到的抑菌帶寬普遍大于含菌培養(yǎng)基法得到的，只有Tmt3-2-1和TbYYk1-1兩個菌株是例外。通過兩種方法比較，認(rèn)為噴霧法比含菌培養(yǎng)基法操作簡便、快捷，比較適用于平板篩選試驗。 3

5、.平板篩選出的抑菌帶寬≥1 cm的21株菌株，對它們進行煙草青枯病的溫室控病試驗。初測結(jié)果表明：這21株菌株大部分能夠使煙草推遲7 d發(fā)病，CKB只灌接待測菌株的煙草苗未表現(xiàn)明顯異常，初步說明它們對煙草是安全的。在接種20 d后，相對防效＜70％有6株，其余的相對防效＞70％。結(jié)合菌株在NA培養(yǎng)基上的生長勢，將其中的6株進行復(fù)測。結(jié)果表明：L6-3、Tmjdl-3、Au004-1、TbYYk1-1和Aujd8-2-1處理分別較CKRs推

6、遲發(fā)病14 d、6 d、5 d、2 d和1 d。L6-3、Au004-1和Tmjd1-3處理對煙草青桔瘸的溫室控瘸效果較好。在接種30 d后，它們的相對防效分別達到80.83％、77.5％和75％，其中L6-3處理的相對防效最好。 4.在NA培養(yǎng)基上的生長勢較好且溫室控病效果較好的青枯無致病力菌株Au004-1和Tmjdl-3，用它們分別處理煙草后測定植株體內(nèi)的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、過氧化物酶(POD)及多酚氧化酶(PPO)活性，并