小麥nsLTPs基因及啟動(dòng)子的克隆與功能分析.pdf

1、植物非特異轉(zhuǎn)脂蛋白（non-specific Lipid Transfer Poteins, nsLTPs）在植物中表達(dá)豐富、功能繁多、參與植物多種生長(zhǎng)發(fā)育、抗病抗逆等過(guò)程，然而對(duì)小麥中的非特異轉(zhuǎn)脂蛋白基因的功能研究少之又少。在本研究中，我們分析了來(lái)自小麥的三個(gè)植物非特異轉(zhuǎn)脂蛋白基因及啟動(dòng)子的功能，主要的工作如下：
　　從小麥中克隆了三個(gè)植物非特異轉(zhuǎn)脂蛋白基因并在擬南芥中過(guò)量表達(dá)，對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行低溫脅迫鑒定試驗(yàn)表明，在冷害處理

2、中三個(gè) TaLTPI擬南芥轉(zhuǎn)基因苗比野生型根長(zhǎng)明顯增長(zhǎng)，說(shuō)明小麥中的 TaLTPs基因可能有保守的抵御冷害的功能，對(duì)于冷害脅迫下根部的生長(zhǎng)起到促進(jìn)作用。
　?。?）對(duì)小麥幼苗進(jìn)行脅迫鑒定試驗(yàn)表明，TaLTPIb.1、TaLTPIb.5基因在低溫處理、創(chuàng)傷處理、干旱處理中都是明顯上調(diào)表達(dá)的，并且表達(dá)模式相似；而 TaLTPId.1只對(duì)黑暗處理有明顯響應(yīng)。在激素處理中，三個(gè) TaLTP基因都受到水楊酸（Salicylic acid,

3、SA）誘導(dǎo)，而TaLTPId.1也可以被茉莉酸（Jasmonic acid，JA）誘導(dǎo)。
　?。?）構(gòu)建了35S::TaLTPIb.1::EGFP和35S::TaLTPIb.5::EGFP、35S::TaLTPId.1::EG FP融合載體，分別利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)、基因槍的方法在煙草葉片和洋蔥表皮上對(duì)三個(gè) Ta LTPI基因進(jìn)行了亞細(xì)胞定位，發(fā)現(xiàn)三個(gè)基因都定位于細(xì)胞膜上，而 TaLTPId.1在細(xì)胞質(zhì)中也有一些信號(hào)，暗示了 TaLTP

4、I基因在具有保守功能同時(shí)也發(fā)生了一些亞功能化的分化。
　?。?）利用三個(gè)基因的特異引物將 TaLTPIb.1、TaLTPIb.5定位在3B染色體與3D染色體上，而TaLTPId.1則定位于5D染色體。
　?。?）將 TaLTPIb.1基因上游-723bp的啟動(dòng)子序列融合 GUS基因構(gòu)建至pCambia1391Z，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)入短柄草，發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子活性主要集中在轉(zhuǎn)基因苗幼葉、幼芽的表皮細(xì)胞中，并且受創(chuàng)傷處理誘導(dǎo)，受黑暗處理抑