HIF-1α調(diào)節(jié)神經(jīng)母細胞瘤生物學特征的機制研究.pdf

1、目的：神經(jīng)母細胞瘤（neuroblastoma,NB）是最常見的兒童惡性實體腫瘤之一，其總體治療效果不佳。當腫瘤快速生長、血供不足時，其內(nèi)部常產(chǎn)生低氧現(xiàn)象。低氧誘導因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）是重要的轉(zhuǎn)錄因子，在低氧下調(diào)節(jié)腫瘤細胞的許多生物學行為，如生長、侵襲、血管生成、耐放化療等。本研究旨在闡明HIF-1α對NB生長、侵襲、去分化的影響及其作用機制。
　　方法：首先我們構建H

2、IF-1α過表達以及核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)干擾的慢病毒載體。用免疫組化測定臨床NB標本中HIF-1α、Sonic Hedgehog（SHH）信號通路蛋白表達，并評價和腫瘤分期、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預后的關系。通過慢病毒載體轉(zhuǎn)染，使2種NB細胞（SH-SY5Y和IMR32細胞）的HIF-1α過表達或基因沉默，從而研究HIF-1α在NB增殖、遷移、侵襲中的作用，并運用實時熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase

3、 chain reaction，PCR）和Western blotting評價HIF-1α對SHH通路的調(diào)控作用。此外，建立裸鼠移植瘤模型，在體內(nèi)驗證HIF-1α對NB細胞生長的影響。并通過流式細胞儀，從SH-SY5Y細胞中分選出側(cè)群（side population,SP）細胞和非側(cè)群細胞，比較兩者HIF-1α和SHH信號分子的差異。通過慢病毒轉(zhuǎn)染，使SP細胞HIF-1α過表達或沉默后，運用Western blotting、免疫熒光、實

4、時熒光定量PCR評價HIF-1α對SP細胞腫瘤干細胞標志物(ABCG2，Oct4，c-kit）表達的影響。
　　結(jié)果：HIF-1α和SHH信號分子SHH、 PTCH1、GLI1在NB標本中的陽性率分別為57.7％、64.8%、46.5%、54.9%。Spearman相關分析顯示NB標本中HIF-1α和SHH、GLI1的表達水平呈正相關，HIF-1α、SHH、GLI1的表達水平和腫瘤分期呈正相關。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者SHH、GLI1陽性率

5、更高，而分化差的腫瘤HIF-1α、GLI1的陽性率更高。Kaplan-Meier生存分析顯示HIF-1α或SHH陽性者較陰性者2年存活率更低。HIF-1α在常氧、低氧下均能促進NB細胞侵襲，但僅在低氧下促進其增殖和遷移。實時熒光定量PCR和Western blotting顯示，HIF-1α在轉(zhuǎn)錄水平正向調(diào)節(jié)NB細胞的SHH通路，進而影響其蛋白表達。裸鼠移植瘤模型證實HIF-1α可在體內(nèi)促進NB生長并調(diào)節(jié)SHH通路。SP細胞腫瘤干細胞標志