小蓬竹(Drepanostachyum luodianense)內(nèi)生真菌與根際真菌多樣性的研究.pdf

1、本文以喀斯特地區(qū)特有瀕危物種小蓬竹[Drepanostachyum luodianense(Yiet R.S.Wang)Keng f.]為研究對(duì)象，在優(yōu)化確立了小蓬竹內(nèi)生真菌分離方法的基礎(chǔ)上，采用組織塊分離法與組織液研磨提取法從小蓬竹的根、莖、葉中共分離出103株內(nèi)生真菌，并通過(guò)經(jīng)典形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行鑒定，最后進(jìn)一步探討了根部?jī)?nèi)生真菌與土壤根際真菌的相關(guān)性。主要研究結(jié)果如下：
　　1.系統(tǒng)的優(yōu)化確立了小蓬竹內(nèi)生真菌分離

2、方法。本實(shí)驗(yàn)以次氯酸鈉溶液作為主要消毒劑對(duì)小蓬竹組織表面進(jìn)行消毒，并針對(duì)不同組織所需的次氯酸鈉溶液濃度和消毒時(shí)間設(shè)置梯度進(jìn)行了探索，實(shí)驗(yàn)確定了小蓬竹各組織表面消毒的最佳方式：葉，含有效氯2.5％NaCIO溶液1min；莖，2.5%NaCIO溶液2min；根，5%NaCIO溶液3min。此外，通過(guò)對(duì)分離培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的篩選，確定了25%濃度的PDA雙抗培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度26℃作為小蓬竹分離內(nèi)生真菌的最佳，可最大限度的分離小蓬竹的內(nèi)生真菌。

3、
　　2.系統(tǒng)的對(duì)小蓬竹不同組織中的內(nèi)生真菌進(jìn)行分離與鑒定。本實(shí)驗(yàn)用組織塊分離法共計(jì)從180個(gè)供試組織塊中共分離得到81株內(nèi)生真菌，用組織液研磨提取法共計(jì)從120個(gè)培養(yǎng)基平板中分離得到22株內(nèi)生真菌。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，小蓬竹內(nèi)生真菌總內(nèi)生真菌的定殖率為47.2%，根、莖和葉定殖率分別為73.3%、35.0%和33.3%；總的分離率為45%，根、莖和葉分離率分別為91.7%、20.0%和23.3%，均為根最高，莖葉次之，呈現(xiàn)隨著植物組織的成

4、熟程度而增加的趨勢(shì)。對(duì)分離到的103株通過(guò)經(jīng)典形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行鑒定，分屬于1個(gè)亞門、5個(gè)綱、10個(gè)目、17個(gè)科、19個(gè)屬、31個(gè)種（含2個(gè)可能的新種），在屬的分類水平上，以節(jié)菱孢霉屬(Arthrinium)、鐮刀菌屬(Fusarium)、木霉屬(Trichoderma)、炭角菌屬(Xylaria)為優(yōu)勢(shì)菌屬，分別占菌株總數(shù)的12.62%、9.71%、6.80%。結(jié)果表明了小蓬竹內(nèi)生真菌的豐富多樣性。
　　3.小蓬竹內(nèi)

5、生真菌多樣性及組織分布特性。在小蓬竹內(nèi)生真菌的數(shù)量和種類及分布上，不同組織中存在明顯差異并表現(xiàn)出一定的組織特異性：根中內(nèi)真菌的分離頻率最高，達(dá)到61.17%，其中鐮刀菌屬與漆斑菌屬的分離頻率最高；莖中以擬莖點(diǎn)霉屬、彎孢聚殼屬等為優(yōu)勢(shì)菌屬；葉片中節(jié)菱孢霉屬為優(yōu)勢(shì)菌屬。在多樣性指數(shù)方面：小蓬竹內(nèi)生真菌Shannon-Wiene和Simpson指數(shù)依次為2.800、0.932，不同組織在變化趨勢(shì)上一致，均為根最高，莖其次，葉片最低；小蓬竹內(nèi)生

6、真菌均勻度指數(shù) E為0.604，莖為最高，根其次，葉片最低。此外，不同組織中內(nèi)生真菌菌群的相似性比較發(fā)現(xiàn)根莖的相似性最低，莖葉的相似性最高。
　　4.通過(guò)將小蓬竹根部?jī)?nèi)生真菌與根際土壤真菌的比較，發(fā)現(xiàn)其共同存在的真菌類群為暗雙孢屬(Cordana)、節(jié)菱孢霉屬(Arthrinium)、脈孢菌屬(Neurospora)、木霉屬(Trichoderma)、漆斑菌屬(Myrothecium)，表明兩個(gè)類群之間存在密切的聯(lián)系，可能存在互相

7、交流和傳播。另外研究發(fā)現(xiàn)，在根組織分離得到內(nèi)生真菌中優(yōu)勢(shì)菌群為鐮刀菌屬與漆斑菌屬，以寄生性較強(qiáng)菌群為主；而根際土壤真菌的優(yōu)勢(shì)菌群為青霉菌屬、木霉屬、曲霉屬一類腐生性較強(qiáng)的菌群為主，說(shuō)明兩個(gè)類群之間亦存在明顯差異，表明內(nèi)生真菌可能具有其他來(lái)源。
　　5.通過(guò)該研究，我們系統(tǒng)地了解了小蓬竹各個(gè)不同組織內(nèi)生真菌的狀況、來(lái)源及分布，為進(jìn)一步為研究和利用其內(nèi)生真菌資源、小蓬竹引種栽培和保護(hù)與利用提供了理論依據(jù)。上述結(jié)果表明，小蓬竹內(nèi)生真菌與