甲型肝炎病毒衣殼蛋白轉(zhuǎn)基因柑桔食用疫苗的初步研究.pdf

1、甲型肝炎是由一種經(jīng)由腸道傳染的病毒即甲型肝炎病毒（HAV）感染肝臟細胞而引起的急性傳染病，是嚴重威脅人類健康的世界性傳染病。轉(zhuǎn)基因植物食用疫苗具有接種簡便、成本低廉的優(yōu)點，是目前正在進行的一項新的探索。本研究選用柑桔作為表達甲肝病毒衣殼蛋白的生物反應(yīng)器，將果實作為可以直接口服的疫苗，旨在探索一種甲肝疫苗新途徑。HAV基因組編碼的衣殼蛋白決定病毒的抗原性、免疫原性和對敏感細胞的吸附性，是探索、研究基因工程疫苗的焦點。為實現(xiàn)HAV衣殼蛋白

2、基因（HAV-CP）這個重要功能基因的表達調(diào)控，選用含有花椰菜花葉病毒啟動子（CaMV 35S啟動子）的植物表達載體pBI121作為基本框架，將HAV-CP基因插入質(zhì)粒T-DNA左右邊界區(qū)間內(nèi)，構(gòu)建pBI121-HAV-CP植物表達載體。經(jīng)限制性內(nèi)切酶分析和PCR鑒定后，利用凍融法將重組質(zhì)粒pBI121-HAV-CP導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404中。以錦橙上胚軸為轉(zhuǎn)化受體材料，農(nóng)桿菌浸染10分鐘，共培養(yǎng)2天。頭孢霉素脫菌培養(yǎng)后選用50 m