SDF-1α及其受體在糖尿病大鼠腎臟中表達(dá)及作用的研究.pdf

1、目的：
　　 研究糖尿病大鼠腎臟中SDF-1α及受體CXCR4的表達(dá)，研究血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）與SDF-1α及受體CXCR4在糖尿病腎病中的相互關(guān)系，以及厄貝沙坦對SDF-1α及受體CXCR4、VEGF的作用，對糖尿病腎病的臨床治療，延緩其發(fā)展提供新的理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 選取清潔級健康雄性Wistar大鼠48只，體重180-200g，將大鼠隨機(jī)分為正常組（A）、糖尿病腎病對照組（B）和糖尿病腎

2、病治療組（c）各16只。標(biāo)準(zhǔn)化喂養(yǎng)一周后，所有大鼠麻醉后行右腎切除術(shù)。兩周后，糖尿病腎病各組（B、C組）大鼠給予腹腔注射單劑量的鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）60mg/kg，A組大鼠則給予等劑量的枸櫞酸緩沖液腹腔內(nèi)注射。72 h后至少連續(xù)3天尾靜脈檢測血糖。以連續(xù)3次血糖≥16.7 mmol/L，為糖尿病成模標(biāo)準(zhǔn)。糖尿病腎病治療組（C）即厄貝沙坦治療組，自注射STZ糖尿病模型建立成功后，開始給于厄貝沙坦25mg/kg

3、·d灌胃給藥，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。糖尿病對照組B組和正常對照組A組大鼠給予同等劑量生理鹽水，分別測定4周、8周、16周時糖尿病大鼠空腹血糖、血脂、糖化血紅蛋白、24 h尿微量白蛋白排泄率（UAER）（放射免疫法）、血肌酐、血尿素氮、內(nèi)生肌酐清除率，并對三組的同時期各項(xiàng)結(jié)果進(jìn)行比較，分析各指標(biāo)之間的相關(guān)性。第16周末處死全部大鼠，取腎組織學(xué)標(biāo)本，剝離被膜，稱重，測定腎重/體重比值、計(jì)算腎臟肥大指數(shù)（KW/BW）（雙腎重量之和與體積比）。取部分腎組

4、織放入10％福爾馬林溶液中，行石蠟切片，用于HE、PAS染色；用HE、PAS染色觀察各組腎臟病理形態(tài)學(xué)改變；應(yīng)用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對腎小球平均體積（MGV）和系膜面積比（FMA）進(jìn)行分析；用免疫組化半定量分析SDF-1α及受體CXCR4、VEGF的表達(dá)，并對各種指標(biāo)作相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：
　　 （1）、大鼠存活情況：正常對照組（A組）全部存活；糖尿病對照組（B組）第75、80、93、105天因感染各死亡1只；糖尿病治

5、療組（C組）第95、108天因高血糖高滲狀態(tài)各死亡1只；
　　 （2）、一般狀況：正常對照組（A組）大鼠的狀態(tài)較好，毛色光澤，反應(yīng)靈敏，體重增加。糖尿病腎病對照組（B組）的大鼠出現(xiàn)多飲、多尿、多食、體重減輕的典型的“三多一少”癥狀，其皮毛枯黃，并出現(xiàn)皮下膿腫、行動遲緩。其中1只大鼠出現(xiàn)白內(nèi)障，1只大鼠出現(xiàn)反復(fù)腹瀉，4只大鼠因感染死亡。與B組大鼠比較，同期C組大鼠中2只大鼠因高血糖高滲狀態(tài)死亡，其余大鼠“三多一少”癥狀明顯改善，毛

6、色較光澤，體重有所增加。表明厄貝沙坦能在一定程度上控制DM癥狀。
　　 （3）、各項(xiàng)生化指標(biāo)：①血糖、血脂、糖化血紅蛋白：第16周時，糖尿病腎病對照組和治療組即B組和C組的血糖、血脂及糖化血紅蛋白，與A組相比，都明顯升高（P<0.05）；而糖尿病腎病各組B、C組之間的血糖無顯著差異（P>0.05）。②UAER：與A組同期相比，B組大鼠UAER于第8周時顯著升高：到第16周，UAER仍持續(xù)升高，且比第8周時升高明顯。C組與B組相比

7、，同期UAER均有不同程度的下降（P<0.05）。③Scr：第16周時，B組大鼠的Scr比A組明顯增高（P<0.05）；與B組相比，C組Scr有顯著下降（P<0.05），且與A組大鼠的Scr水平相當(dāng)（P<0.05）。④Ccr：第16周時B組大鼠的Ccr與A組相比，已開始下降（P<0.05）C組則下降更明顯，但Ccr仍高于A組（P<0.05）。
　　 （4）、第16周時，測定大鼠腎重、腎臟肥大指數(shù)（KW/BW）、系膜面積比（FMA

8、），腎小球平均體積（MGV）與A組相比，B組大鼠的KW/BW、MGV、FMA均明顯增大（P<0.05）。C組與B組相比，KW/BW、MGV、FMA均有不同程度的下降（P<0.05），但仍高于A組（P<0.05）。
　　 （5）、第16周免疫組化方法觀察腎組織中SDF-1α、CXCR4及VEGF的表達(dá)：在A組正常對照組SDF-1α、CXCR4及VEGF均弱陽性表達(dá)，而糖尿病腎病各組（B、C組）SDF-1α、CXCR4及VEGF在腎

9、小管上皮細(xì)胞的胞漿及腎小球壁層上皮細(xì)胞內(nèi)表達(dá)增強(qiáng)，并在炎性及纖維化的間質(zhì)中表達(dá)更明顯；且三種細(xì)胞因子的著色隨著病程延長而增強(qiáng)。B組糖尿病腎病大鼠第16周。腎組織中總體SDF-1α、CXCR4及VEGF明顯增高，與A組正常對照組相比，相差顯著（P<0.01），C組治療組與B組對照組相比，總體SDF-1α、CXCR4及VEGF含量明顯降低（P<0.01），C組治療組SDF-1α、CXCR4及VEGF明顯被抑制，與B組對照組相比降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意