乳腺癌MCF-7耐放射細(xì)胞亞株的建立及其抗拒機(jī)制的研究.pdf

1、目的：乳腺癌放射治療的個(gè)體差異性較大，常出現(xiàn)放療抵抗的情況。研究乳腺癌放療抵抗現(xiàn)象發(fā)生的分子生物學(xué)機(jī)制對(duì)于逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐放射性、提高放療效果具有非常重要的意義。本實(shí)驗(yàn)探索誘導(dǎo)并建立人乳腺癌耐放射細(xì)胞亞株的體外實(shí)驗(yàn)方法及其放射抗拒性的初步機(jī)制。
　　方法:以人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過體外細(xì)胞培養(yǎng)，應(yīng)用X-射線對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7進(jìn)行梯度遞增的誘導(dǎo)照射，得到MCF-7耐放射細(xì)胞亞株：MCF-7R。隨后觀察其細(xì)胞形

2、態(tài)學(xué)、細(xì)胞周期與凋亡及放射敏感性的變化，并與乳腺癌親本株MCF-7比較。掃描電鏡和透射電鏡對(duì)比觀察親本株與耐放射細(xì)胞亞株細(xì)胞內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)；流式細(xì)胞儀(flow cytometry, FCM)FCM檢測(cè)其細(xì)胞周期與凋亡；集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其放射敏感性，并計(jì)算存活分?jǐn)?shù)，單擊多靶模型擬合細(xì)胞存活曲線。以6GyX-射線分別照射親本株 MCF-7與耐放射細(xì)胞亞株 MCF-7R，Western blot法分別檢測(cè)MCF-7，MCF-7R，MCF-7

3、+6Gy，MCF-7R+6Gy4組的pAkt、HIF-1α蛋白表達(dá)，探討乳腺癌產(chǎn)生放射抗拒性的初步機(jī)制。
　　結(jié)果：⑴電鏡學(xué)顯示耐放射細(xì)胞亞株MCF-7R外形及細(xì)胞器均出現(xiàn)明顯改變。⑵細(xì)胞周期分布結(jié)果顯示：G0/G1期百分比由52.81±0.14升高至57.65±1.09(p<0.01)；S期百分比由33.39±0.12降低至32.92±0.04(p<0.05)；G2/M期百分比明顯下降，由13.32±0.2降到9.43±0.11

4、，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(p<0.01)；凋亡率由2.03±0.22升到7.35±0.41(p<0.01)。⑶準(zhǔn)域劑量Dq值由2.261升高至3.695(p<0.05)；平均致死劑量Do值由1.215升高至1.834(p<0.05)；照射2Gy時(shí)細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)SF2值（由0.62升到0.96），增高34％，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(p<0.001)。⑷Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示：MCF-7R組pAkt、HIF-1α蛋白的表達(dá)高于親本株M

5、CF-7，差異有統(tǒng)計(jì)意義(p<0.05)；MCF-7R+6Gy組分別與MCF-7組、MCF-7R、MCF-7+6Gy比較，前者的pAkt、HIF-1α蛋白表達(dá)明顯增高（P<0.01），而MCF-7與MCF-7+6Gy組相比較二者pAkt、HIF-1α蛋白表達(dá)差別無顯著性（P>0.05）。
　　結(jié)論：①小劑量梯度增加照射誘導(dǎo)法能較好地建立MCF-7R乳腺癌耐放射細(xì)胞亞株。②乳腺癌耐放射機(jī)制與PI3K/Akt通路相關(guān)聯(lián)，并可能通過PI